HSC70抗病毒机制_原创精品文档.pdfVIP

人HSC70调控细胞抗病毒反应的初探

学院：生物工程学院学生姓名：周筱飞

专业班级：生物技术0802班指导教师：刘志刚讲师

[摘要]HSC70在细胞抗病毒天然免疫反应中发挥负调控功能。本研究用荧光素酶报告基因实

验，通过上调与下调细胞内HSC70的表达来验证HSC70的负调控功能，并进一步探究了

其抑制I型干扰素转录表达的水平。

[关键词]抗病毒反应；负调控；I型干扰素；HSC70

StudyonhumanHSC70´sregulationtocellantiviralresponse

Abstract:HSC70playsanegativeregulatoryfunctioninthecellantiviralinnateimmune

response.Inthisstudy,weusetheluciferasereportergeneexperiments,viaupwardand

downwardtheexpressionofHSC70inthecelltoverifythenegativeregulatoryfunctionof

HSC70,andfurtherexplorethelevelonwhichitinhibittheexpressionandtranscriptionoftypeI

interferon.

Keywords:Anti-viralresponse,Negativelyregulation,TypeIinterferon,HSC70

1内容简介

病毒在感染高等生物体后，产生的细胞因子（包括I型干扰素）通过血循环并在穿过血

脑屏障后刺激中枢神经调高体温，产生发热症状，上调胞内热休克蛋白的表达。前期研究发

现热休克蛋白家族有些成员能够通过抑制I型干扰素等细胞因子的转录合成而在抗病毒天

然免疫中发挥调控功能，其中以HSC70的作用最为明显。本项目是在这基础上，在细胞水

平验证HSC70在抗病毒天然免疫反应中的调控功能。

2实验部分

2.1实验材料

材料来源

HEK293细胞,仙台病毒SeV购自ATCC

pGL3-ISRE、pGL3-NF-κB、pGL3-IFN-β启动子、pGL3-IRF1启动子萤

购自Strategene公司

火虫荧光素酶报告基因质粒

pSuper.Retro购自Oligoengine公司

胎牛血清、1%青霉素和链霉素溶液、0.05%胰酶溶液、DMEM培养基

购自GIBCO公司

Taq酶、DNA限制性内切酶、T4连接酶购自Promega公司

小鼠抗FLAG单克隆抗体、辣根过氧化物酶HRP标记羊抗鼠IgG

购自PIERCE公司

荧光素酶底物发光检测仪Promega公司

2.2实验方法

1

2.2.1细胞培养

本项研究中所用HEK293细胞为贴壁培养的细胞，培养液为含有10%胎牛血清和0.01%

青霉素和链霉素溶液的DMEM高糖培养基，置于二氧化碳浓度为5%的37℃培养箱中培养，

两天传代