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产前筛查实验室作业指导书

文件编号:JSFY-CQSX-ZY05

版本/修订号：第一版

主题内容

甲胎蛋白检测操作规程

生效日期第1页共2页

甲胎蛋白检测操作规程

【检验原理】

产品采用双抗体来心法定量测定人血清中的甲胎蛋白（AFP）的含量。在微孔版的孔内先包被了识别抗AFP的单克隆抗体，用辣根过氧化酶标记另一株与之配对的单克隆抗体。待测孕妇血清样本中的AFP与包被的和酶标记的两株单克隆抗体形成夹心抗原抗体反应。再加上发光底物用微孔板发光分析仪读取发光数值,发光值与待测血清中AFP含量成正比。

【储存条件及有效期】

试剂盒于2-8°C避光贮存，不得冻存,有效为12个月。

开封有效期:板条开封后2-8C存放效期为3个月，其他液体组份同成品试剂盒效期。

【检测仪器及试剂】

仪器：重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪

试剂：潍坊康华甲胎蛋白检测试剂盒（化学发光法）

【样本要求】

抽取静脉血3mL,置一次性采血管内，充分离心，吸取血清,不应有溶血及细胞颗粒:血清标本4C存放最好不要超过3天，若不能及时检测，应-20C冻存，检测时应将标本融化后混合均匀，并避免反复冻融。

【检验方法】

手工操作步骤：

1、 将在冷藏环境中贮存的试剂室温平衡30分钟

2、 ，将浓缩洗涤液按1:40的比例稀释，摇匀备用，作为应用洗涤液

3、 根据AFP参考品、质控品及待测标本确定所需孔数。

4、 直接取AFP参考品、质控品及标本各25微升加入相应孔内，再每孔加入50微升AFP酶结合物,用振荡器振荡30秒钟（此步非常重要），盖上封板膜，置37C温浴1小时。

5、 取出，用应用洗涤液洗涤5次，洗涤时每孔注满洗涤液，停留10秒后吸尽拍干。

6、 根据使用量，将底物液A、B按1:1混匀，现用现配。每孔加入50微升,用振荡器振荡20秒钟，设定每孔测量时间为1秒，于10-20分钟内测定结果。

仪器操作步骤：

按照重庆科斯迈全自动化学发光免疫分析仪操作规程检测。

【参考区间】

测定正常人血清样本并结合参考文献的报道建议正常参考值范围如下：

正常人血清中AFP浓度＜20ng/mL

若用于产前筛查，应结合相应的风险分析评估软件使用。

由于地区及人群的差异，以上范围仅供参考，各实验室在长期实践中应建立本实验室自己的正常参考值范围。

【检验结果的解释】

AFP质控品Q1浓度应为2.5-7.5ng/mL,质控品Q2应为105~195ng/mL

【检验方法的局限性】

1、 每次检测必须做AFP标准曲线，不能使用以前做过的标准曲线。

2、 含大量脂质、严重黄及溶血或加热灭活之标本均可能影响检测结果。

3、 建议按《产前诊断技术管理办法》的有关规定使用本品

4、 本品仅用于人血清的测定,不得使用抗凝血浆。

5、 用其他方法得出的AFP浓度值与本品测定结果不具有直接的可比性，应结合其他有关的临床诊断结果作

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解释

6、本试剂盒超出标准曲线范围的样品应适当稀释后测定其准确值。

【产品性能指标】

1、 最低检测限:不高于1.ong/mL

2、 剂量-反应曲线的线性:在线性区间1.0ng/mL-600ng/mL内，剂量反应曲线相关系数(r)不小于0.9900。

3、 准确度:相对偏差不超过士10.0%。

4、 精密度:分析内精密度:手工操作试剂盒CV不高于10.0%,全自动操作的试剂盒CV不高于8.096:分析间精密度(仅限手工操作试剂盒)CV不高于15.0%;批间精密度CV不高于15.0%。

5、 特异性:10份正常血清的检测结果均不高于20.0ngmL

【注意事项】

1、 本试剂盒仅限于体外诊断用，一个试剂盒应作为整体应用，并请在有效期内使用。

2、 浓缩洗涤液会有结晶析出，可于37r水浴溶解,不影响使用。

3、 试剂用前应摇匀,标本不可反复冻融。

4、 请将拆封后未用完的包被板条放入自封袋内封紧保存，请勿受潮。

5、 洗涤时各孔需加满洗涤液，防止孔中有游离酶不能洗净。

6、 样本中加入120IU/mL类风湿因子、80mgdL胆红素、3000mgdL甘油三酯对检测结果未产生影响:样本中含2000mg/dL血红蛋白导致假阳性，建议不使用溶血样本。

7、 试剂各组分皆经灭活处理，但仍应视为具有潜在感染性。

8、 本试剂盒仅供体外筛查用,高危者必须依靠染色体分析做最终判断。