《生物化学》实验教学大纲.docVIP

《生物化学》实验教学大纲

一、课程编号

适用专业：临床医学

课程类别：学科专业基础必修

开课学期：3

实验学时：24

二、开课实验室：

基础医学部生物化学实验室

三、实验教材及参考书

教材：卢新华主编，《机能实验学》第二版，世界图书出版社，出版时间，2011年

参考书目：吴士良主编，《生物化学与分子生物学实验教程》第一版，科学出版社，出版时间，2006年

四、实验教学目的和要求

1.实验前预习实验讲义与有关理论，明确实验目的、原理、预期的结果、操作关键步骤及注意事项，计划安排实验工作时间。勤于动手细心操作，认真观察实验变化过程与记录原始数据，善于理论联系实践，综合分析实验现象与准确解释并得出实验结论，及时完成实验报告。

2.掌握各项生物化学实验的基本操作技能：生化物质的分离、制备、分析和鉴定等基本实验技术及原理；各种常用玻璃仪器的洗涤和使用，如刻度吸量管的使用；离心机、电泳系统、分光光度计等常规仪器的原理及使用。

3.掌握以下各项生化实验基本原理和基本技术：实验基本操作训练、蛋白质的两性反应与蛋白质等电点的测定方法；蛋白质电泳技术；检测影响酶活性因素的方法；分离纯化与鉴定糖原的方法分光光度计的使用与定量实验。

五、考核形式要求

实验成绩占总评成绩的20%，其中实验报告成绩与实验操作考核成绩各占10%。

六、实验项目及要求

序号

实验项目名称

实验

类型

实验

学时

每组

人数

实验

要求

目的要求

1

基本操作训练、

蛋白质的两性反应和酪蛋白等电点的测定

验证

4

20

必修

掌握一般玻璃仪器的洗涤法和刻度吸量管的使用。

蛋白质的两性反应性质。

蛋白质等电点的测定。

2

醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质

综合

4

20

必修

掌握电泳技术的原理及醋酸纤维薄膜电泳操作技术。

3

温度、酸碱度、激活剂与抑制剂对酶活性的影响

验证

4

20

必修

掌握温度、pH、激活剂与抑制剂对酶活性的影响。

4

肝糖原的提取、鉴定与定量

综合

4

20

必修

掌握提取动物肝糖原的方法，通过实验观察饥饿和饱食对肝糖原含量的影响。

5

分光光度法、分光光度计的使用及血糖的测定

综合

4

20

必修

掌握分光光度法原理及分光光度计的使用。

掌握邻甲苯胺法测血糖。

6

分子生物学技术（电教）

演示

2

20

必修

了解常用分子生物学技术

7

实验操作考核

综合

2

20

必修

检查学生实际操作能力

实验一实验基本操作训练、蛋白质的两性反应、蛋白质等电点的测定

目的和要求：刻度吸量管的使用；通过实验进一步了解蛋白质的两性反应性质，熟悉操作方法，分析和判断实验结果。

实验内容：认识刻度吸量管、掌握选用原则及使用方法；训练用1ml、2ml、5ml等刻度吸量管准确吸取1ml、2ml、5ml自来水，放入试管中，然后用1ml吸量管取0.5ml硫酸铜溶液分别加入上述试管中，用不同的方法混匀；蛋白质分子是两性电解质，pH＜pI，使蛋白质带正电荷；pH＞pI，使蛋白质带负电荷；蛋白质在等电点时所带的正负电荷相等，净电荷为零，此时溶解度最小，容易聚沉。用酸与碱分别滴入蛋白质溶液，借助酸碱指示剂初步判断蛋白质带电荷状况及等电点范围。用不同浓度醋酸与醋酸钠溶液配制成不同pH值溶液，观察酪蛋白在不同pH值溶液中的溶解状况，推理出蛋白质的等电点。

实验二醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质

目的和要求：了解电泳的一般原理，掌握醋酸纤维薄膜电泳操作技术。

实验内容：血清中各种蛋白质的等电点大都低于7.0，在pH8.6的缓冲液中它们电离成负离子，在电场中向正极移动。将醋酸纤维薄膜浸泡于pH8.6的缓冲液中，血清蛋白质点样后，进行电泳，由于各种蛋白质的等电点、分子量、分子形状不一，在同一电场中的迁移率不同而将其分离。

实验三温度、酸碱度、激活剂与抑制剂对酶活性的影响

目的和要求：加深对酶的化学本质的认识；了解温度、pH、激活剂与抑制剂对酶活性的影响。

实验内容：酶活性易受环境温度的影响。在最适温度时，酶促反应速度最快。高于或低于最适温度时，反应速度逐渐降低。温度过高时可引起蛋白质变性，导致酶的失活。大多数动物酶的最适温度为37～40℃。

酶活性易受环境pH的影响极为显著。通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活性。在最适pH时，酶促反应速度最快，过酸或过碱都会使酶的活性降低，甚至使酶蛋白变性失活。不同酶的最适pH不相同。酶活性还受激活剂与抑制剂的影响；如氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。

实验四肝糖原的提取、鉴定与定量

目的和要求：掌握提取动物肝糖原的方法及鉴定，了解糖原定量的方法