预处理及固液分离技术.pptVIP

三、离心技术〔分离较难分离物系〕在液相非均匀体系中，利用离心力来达到液液分离、液固分离、液液固分离的方法都称为～离心分离。其中液固分离分离心沉降和离心过滤。第63页,共78页，2024年2月25日，星期天离心分离方法（1）差速离心分离－生化工业中最常用分离方法实际物系的特点、分离目的、分离程度（目标产物和其它组分的性质及相互作用等）选择适当的操作条件（离心转数和时间）使料液的不同组分得到分级分离第64页,共78页，2024年2月25日，星期天细胞破碎液离心600g,10min沉降层/细胞核（4－6μm)上清液(细胞膜碎片、线粒体、溶菌体、核糖体、水溶性物质离心(10000g,10min)沉降层（细胞膜碎片、线粒体、溶菌酶）上清液（核糖体、水溶性物质）离心（100000g，3h)上清液(水溶性物质）沉降层（核糖体）细胞破碎液的差速离心分离第65页,共78页，2024年2月25日，星期天（2）速率区带离心－生化研究的重要分离手段（差速区带离心和平衡区带离心）在离心管中用某种低分子溶质（如蔗糖）调配好密度梯度（从大到小加入）在密度梯度之上加待处理的料液然后进行离心操作区带离心法可用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离纯化，但处理量小，一般仅限于实验室水平。第66页,共78页，2024年2月25日，星期天差速区带离心:密度梯度最大的密度待分离的目标产物密度得到纯化的各组分在离心操作中料液中各个组分在密度梯度中以不同的速度沉降据沉降系数差别形成各自的区带经过一定时间分别汲取不同的区带第67页,共78页，2024年2月25日，星期天平衡区带离心平衡区带离心的密度梯度比差速离心的密度梯度大。料液中高分子物质在与自身密度相等的溶剂密度处形成稳定的区带。区带中的高分子物质浓度以该密度处浓度为中心，呈高斯分布。离心的结果第68页,共78页，2024年2月25日，星期天（3）等密度离心法等密度离心的有效分离仅取决于粒子的密度差，与粒子的大小和形状无关，但是此二者决定着达到平衡的速度、时间和区带宽度。第69页,共78页，2024年2月25日，星期天离心分离设备及处理能力离心机是生物相关实验室及生物制品生产企业广泛使用的分离设备。实验室用离心机以离心管式转子离心机为主，为间歇式。（一般为冷冻离心机）工业用离心设备一般要求有较大的处理能力并连续操作。常用的有管式和蝶式两大类。第70页,共78页，2024年2月25日，星期天第71页,共78页，2024年2月25日，星期天离心机处理能力（一定时间内处理多少料液量）1）管式离心机第72页,共78页，2024年2月25日，星期天2）碟片式离心机第73页,共78页，2024年2月25日，星期天原理?离心分离机（＞100μm）与离心澄清机在构造及分离机制方面很相似。清液液固分离固体轻液重液隔板液液固分离碟片式分离机的原理：固体第74页,共78页，2024年2月25日，星期天颗粒以平均速度v达到上碟片的底表面上，此时，颗粒将不再具有平行于隙道向着轴线的速度vf,在离心力作用下，沿着底表面向外滑去，至碟片的周边处，被摔入碟片组与鼓壁形成的环形空间中0.5~2.5mm颗粒甩向四周清液沿进料管周围排出料液第75页,共78页，2024年2月25日，星期天第76页,共78页，2024年2月25日，星期天大容量冷冻离心机离心分离设备第77页,共78页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第78页,共78页，2024年2月25日，星期天**********影响破碎细胞的因素：加入珠粒体积与直径:加入细小珠粒，利于空穴形成，并有辅助“研磨效应”，提高破碎率。在相同珠粒填充密度下，随珠粒直径变化，k存在最大值。探头的材料和形状：选择具有良好声学和机械性能并对生物物质无毒的金属材料，如：钛，不锈钢等；探头的振幅与其面积呈反比，小直径探头，声能限制在较小范围内，并且效率低。细胞悬浮液的流速：流速增加，破碎率低，处理量大工业未使用，向大量悬浮液通入足够能量，很困难，产热问题。超声波法第31页,共78页，2024年2月25日，星期天机械法破碎细胞的优缺点：优点：内含物全部释放时间短，效率高，成本低通用性强，适于实验室和工业生产缺点：需要高的能量产生高温，高剪切力，引起产