发酵法生产L-异亮氨酸的优化与控制策略研究-张俊丽(1).docxVIP

英文并列题目：研究

英文并列题目：

研究生：专业：研究方向：导师：指导小组成员：

学位授予日期：

密级

硕士学位论文

硕

题目：发酵法生产

题目：

与控制策略研究

StudyonthestrategiesforL-isoleucine

fermentationoptimizationandcontrol

byBrevibacteriumlactofermentation

张俊丽

发酵工程

发酵工学

陈坚教授

李江华副教授刘龙副教授

答辩委员会主席：陆健教授

江南大学

地址：无锡市蠡湖大道1800号

二〇一〇年十一月

(C)1994-2022ChinaAcademicJournalElectronicPublishingHouse.Allrightsreserved.

独创性声明

本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得江南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志

对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。

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关于论文使用授权的说明

本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的规定：江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文，

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保密的学位论文在解密后也遵守此规定。

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导师签名：

日期：

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摘要

摘要

L-异亮氨酸作为人体八种必需氨基酸之一和三种支链氨基酸之一，由于它特殊的结构和功能在人体生命代谢中具有重要作用，它是合成激素、酶类等的原料，具有促进蛋白质合成并可以抑制其分解的作用。L-异亮氨酸已被广泛应用于食品工业、生物医药、化妆品、组织工程、光化学、电化学等领域。目前，L-异亮氨酸也已大量用于饲料添加剂以及添加到饮料中生产功能性饮料。

本论文以一株可以在细胞外积累L-异亮氨酸的乳糖发酵短杆菌(Brevibacteriumlactofermentation)作为生产菌株，以进一步提高L-异亮氨酸的产量、底物转化率和生产强度为目标，对L-异亮氨酸发酵过程进行了一系列优化。主要研究内容和结果如下：

(1)采用DO-stat流加控制培养策略，研究了溶氧浓度20%、30%、35%和40%对B.lactofermentation分批发酵生产L-异亮氨酸的影响，结果表明溶氧浓度控制在20%时，L-异亮氨酸的产量较高，为24.3g/L,与对照相比提高了15.7%,但12.2%的糖酸转化率较分批发酵低。为提高细胞对葡萄糖的利用率，在DO-stat流加发酵的基础上，提出了

快速补料分批发酵的策略，结果表明在36h和52h分别添加150mL的新鲜培养基，发酵液中残留葡萄糖量下降，L-异亮氨酸产量为26.0g/L,比对照提高了7.0%,且糖酸转化率也有提高，为13.0%。在DO-stat流加发酵的基础上，考察了不同初始葡萄糖浓度对L-异亮氨酸合成的影响，在葡萄糖浓度80g/L的条件下，细胞生长较快，糖耗也快，最先进入DO-stat流加控制培养，葡萄糖浓度140g/L的条件下最后进入流加阶段，最终L-异亮氨酸产量较高，为26.2g/L,但糖酸转化率较低，综合考虑，初始葡萄糖浓度还是选择100g/Lc

(2)研究了发酵中后期恒定不同葡萄糖浓度条件下L-异亮氨酸的合成情况，发现不同葡萄糖浓度对L-异亮氨酸的合成影响有明显差异，其中，葡萄糖浓度恒定在20g/L

时，L-异亮氨酸的产量较高，为26.8g/L。通过分析不同条件下L-异亮氨酸的比合成速率曲线，提出了分阶段控制葡萄糖浓度的策略，即采用24h~48h葡萄糖浓度控制在20g/L,48h~68h葡萄糖浓度控制在5.0g/L的两阶段葡萄