2024届高考生物 通过“PCR技术应用”构建PCR类试题 热点解题思维模型 教学PPT模板.pptx

“核心价值”命题“金线”(为什么考);探究路径(一)PCR技术与病毒检测

[见识新情境]

新型冠状病毒感染的常规检测方法是通过实时荧光PCR鉴定。实时荧光PCR扩增目的基因，需额外添加荧光标记探针(一小段单链DNA，可与目的基因中部序列特异性结合)。当探针完整时，不产生荧光。在PCR过程中，与目的基因结合的探针被TaqDNA聚合酶水解，R与Q分离后，R发出的荧光可被检测到(如图甲)，通过实时荧光PCR检测新型冠状病毒感染时，检测到的荧光强度变化如图乙。

;[追根于教材]

1．与指数增长期相比，线性增长期目的基因数量的增长率下降，可能的原因是什么？

提示：TaqDNA聚合酶活性下降、引物浓度下降、原料dNTP浓度下降。;2．Ct值是在PCR扩增过程中，每个反应管内的荧光信号达到设定的荧光阈值时所经历的扩增循环数。请推测样本中初始模板数与Ct值的关系。

提示：当样本中初始模板数越多时，Ct值就越小。

3．某新型冠状病毒核酸检测说明书标明，Ct值≤37判定为阳性，Ct值＞40或无Ct值判定为阴性。图乙所示新型冠状病毒核酸检测结果应判定结果是________(填“阴性”或“阳性”)。

提示：阳性。

;4．阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染。可能产生假阴性的因素有________(填字母)。

a．取样太早，样本中病毒量少，达不到实时荧光PCR检测阈值

b．样本被污染，RNA酶将病毒RNA降解

c．病毒发生变异

提示：abc

;探究路径(二)基因定点突变与基因改造

[见识新情境]

重叠延伸PCR技术是一项重要的基因定点突变技术，其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物(图中的引物2和3，突起处代表与模板链不能互补的突变位点)，分别进行PCR，获得有重叠链的两种DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得想要的目的基因。水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因中的特定位点引入特定突变，使水蛭素第47位的天冬酰胺(密码子为AAC、AAU)替换为赖氨酸(密码子为AAA、AAG)，从而提高水蛭素的抗凝血活性。原理见图。

;[追根于教材]

1．若拟突变位点的碱基对为A—T，则需要让其突变为______才能达到目的。引物2的突变???点(突起处)应设计为______(假设引物为单链DNA)。

提示：C—G或T—AG或A

2．在第一阶段获得两种具有重叠片段DNA的过程中，引物1、引物2组成的反应系统和引物3、引物4组成的反应系统中均进行一次复制，共产生______种DNA分子。该阶段必须将引物1、2和引物3、4置于不同反应系统中，其原因是什么？_____________________________。

提示：3引物2和3中存在互补配对片段，置于同一反应系统时它们会发生结合而失去作用。

;3．利用重叠延伸PCR技术还可以将两个不同来源的DNA片段拼接起来。有人想利用该技术把基因M和N拼接在一起，设计基因M的引物M1、M2，基因N的引物N1、N2。在设计这4种引物时，特别要注意的问题是什么？

提示：M1、M2中的一种引物与N1、N2中的一种引物必须具有互补配对的片段。

;归纳建模

串联PCR技术，构建解答PCR类试题思维模型

;类题训练

1．(2022·全国乙卷)新冠疫情出现后，病毒核酸检测和疫苗接种在疫情防控中发挥了重要作用。回答下列问题。

(1)新冠病毒是一种RNA病毒，检测新冠病毒RNA(核酸检测)可以采取RT-PCR法。这种方法的基本原理是先以病毒RNA为模板合成cDNA，这一过程需要的酶是____________，再通过PCR技术扩增相应的DNA片段。根据检测结果判断被检测者是否感染新冠病毒。

(2)为了确保新冠病毒核酸检测的准确性，在设计PCR引物时必须依据新冠病毒RNA中的__________________来进行。PCR过程每次循环分为3步，其中温度最低的一步是______________。

;(3)某人同时进行了新冠病毒核酸检测和抗体检测(检测体内是否有新冠病毒抗体)，若核酸检测结果为阴性而抗体检测结果为阳性，说明______________________________(答出1种情况即可)；若核酸检测和抗体检测结果均为阳性，说明____________________________。

(4)常见的病毒疫苗有灭活疫苗、蛋白疫苗和重组疫苗等。已知某种病毒的特异性蛋白S(具有抗原性)的编码序列(目的基因)。为了制备蛋白疫苗，可以通过基因工程技术获得大量蛋白S。基因工程的基本操作流程是__________________

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