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不同MHC-B单倍型SPF鸡
对H9N2亚型禽流感病毒的抗性实验
一、研究背景
广泛存在，能感染包括禽类在内的多种属动物，虽然不会起感染禽类
大量死亡，但该病毒传播能力强，存在范围广，可导致产蛋下降、免
疫抑制病、与其他病原共感染时会出现高死亡率，给我国养禽业造成
了巨大的经济损失。目前，我国现有的商品化灭活苗无法完全保护免
疫鸡免受H9N2亚型禽流感病毒的感染。
MHC)基因具有高度多态性，先前的研究表明不同MHC-B单倍型
的鸡对多种疾病的抗性具有显著差异。
二、实验目的
人工感4个品系的MHC单倍型SPF鸡。以喉头和泄殖腔排毒量以及
各脏器的病毒载量为指标，对各品鸡系的H9N2亚型AIV抗性进行
差异，并从中筛选出抗性较强和较为易感的SPF鸡系。
抗性鸡系可在H9N2亚型AIV的预防和种群的净化中发挥重要
的作用，易感鸡系将为我国的H9N2亚型AIV实验研究及疫苗等生
1
物制品的生产提供适合病毒生长的优良材料。
三、实验方案
1.准备好水槽、料槽，检查SFP鸡隔离器(共5个),然后使用
甲醛熏蒸法熏蒸隔离器及动物舍，24h后通风。
分配到4个隔离器中(其中一个品系的鸡较多，可挑出部分作对照组，
饲养于第5个隔离器中)。
mL抗凝血，制备PBMC,用于流式检测，以确定不同鸡的CD3、CD4、
CD8是否分布均匀。
4.致病性实验开始，具体实验方案如下：
数量攻毒日接种方
组别品系接种毒株攻毒剂量
(羽)龄(d)式
G1(B13)
12
0.2mL/羽
G2(B15)H9N2点眼
12
攻毒组(10?
G3(B2)12滴鼻
28EIDso)
G7(B19)12
点眼
对照组待定12PBS0.2mL
滴鼻
注：
检测，确定病毒没有降解后，开始稀释病毒。病毒原液的EIDso值
病毒稀释液)。攻毒时每只鸡接种200μL稀释好的病毒液(在隔
2
离器内，一人保定鸡，另一人使用200μL移液枪缓慢点眼100
菌PBS。
续用于检测攻毒后的排毒情况(先使用每份拭子的原液接种9~11
值)。
(3)攻毒后第2、4、6d每组随机挑选5只鸡，各采集4mL抗
凝血(若鸡较小，采集3mL血),分离PBMC,进行流氏检测，
根据检测结果确定第二天需要剖杀的3只鸡。
(4)每组于攻毒后3、5、7d挑选3只鸡剖杀，采集肝脏、脾脏、
肺脏、肾脏、十二指肠、空肠、回肠、盲肠，暂时冻存于-80℃冰
箱。全部脏器采集完各后取0.5g研磨(可提前准备好装有灭菌钢
双抗的灭菌PBS加入，统一使用可制冷的组织研磨器研磨),10
每份样品研磨液的上清接种9~11日龄鸡胚，72h后收胚测HA,
选择阳性样品继续检测其EIDso值)。
(5)攻毒后第14d对全部存活鸡采集0.5mL非抗凝血用于制备
血清，进行HI检测。
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