3.1基因工程及其技术课件高二下学期生物苏教版选择性必修3.pptx

第一节基因工程及其技术;普通小鼠和巨型小鼠;小鼠受精卵;一、基因工程是在多学科基础上发展而来的;3、1970年，特明和巴尔的摩两位科学家各自在RNA“肿瘤”病毒中发现了逆转录酶。同年，史密斯等又从流感嗜血杆菌中分离到一种特异性很强的限制性内切核酸酶。;5、1973年，科恩领导的研究小组成功地利用大肠杆菌质粒进行了另一个体外重组DNA分子实验。他们将一种含有卡那霉素抗性基因的大肠杆菌质粒和另一种含有四环素抗性基因的大肠杆菌质粒混合后，加入同一种限制性内切核酸酶，对DNA分子进行切割，用DNA连接酶将酶切片段连接起来形成重组DNA分子。这种重组质粒转化大肠杆菌获得成功。;6、1976年，科学家用质粒为载体，将生长激素释放抑制因子基因转入大肠杆菌，并于1977年首次生产出治疗肢端肥大症、巨人症的生长激素释放抑制因子。在这之前，生长激素释放抑制因子是从动物的下丘脑中提取的，10万只羊的下丘脑仅能提取出1mg。通过基因工程制备的工程菌来生产这种激素只需不到2L的培养液便可获得1mg激素。;7、1977年，英国科学家桑格测定了一种噬菌体的基因组序列，这是人类首次对完整基因组的核苷酸排列顺序进行测定。;普通棉花;基因工程又称为DNA重组技术，是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，将外源目的基因与载体DNA进行组合形成重组DNA，然后导入受体细胞，并使其在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。;

;（一）“分子剪刀”——限制性内切核酸酶;4、切割方式：;（2）平切

平切是在DNA分子两条链上相同的部位进行切割，切割后形成平末端。

例：限制酶HaeⅢ的平切结果；;①能被限制酶特异性识别的序列，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基反向互补对称的，即回文序列；

②回文序列：在切割部位，一条链从5’往3’读的碱基顺序与另一条链5’往3’读的顺序完全一致；;注：

①同一种限制酶切割形成的黏性末端相同；;限制酶是原核生物的一种防御工具，用来切割侵入细胞的外源DNA，以保证自身安全。;;缺口怎么办？;（二）“分子黏合剂”——DNA连接酶;限制酶和DNA连接酶的作用示意图：;注：DNA连接酶与DNA聚合酶的区别：;（三）“分子搬运工”——载体;3、质粒载体需要满足的条件

①复制原点，保证在受体细胞中进行独立复制；

②适合的标记基因，用于鉴定和筛选重组DNA分子，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因；

③有一个或多个限制酶切割位点，便于目的基因（外源基因）的插入；

④对受体细胞无害；;小知识：标记基因的筛选原理

载体上的标记基因一般是某种抗生素的抗性基因而受体细胞没有抵抗该抗生素的能力。将含有某抗生素抗性基因的载体导入受体细胞，抗性基因在受体细胞内表达，受体细胞对该抗生素产生抗性。在含有该抗生素的培养基上，能够生存的是被导入了载体的受体细胞。如图所示：;2.作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件之一及理由是

A.能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因

B.具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达

C.具有某些标记基因，以使目的基因能够与其结合

D.对宿主细胞无伤害，以便于重组DNA分子的鉴定和选择;3．下列关于DNA连接酶的叙述，正确的是

A.DNA连接酶连接的是两个DNA片段碱基对之间的氢键

B.DNA连接酶连接的是DNA单链上的磷酸和脱氧核糖

C.DNA连接酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端

D.E.coliDNA连接酶能将双链DNA片段互补的平末端连接起来;5.（多选）下列有关限制性内切核酸酶的叙述，错误的是

A．用限制酶切割一个目的基因两端时，被水解的磷酸二酯键有2个

B．限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的概率就越大

C．5′—↓CATG—3′和5′—G↓CATGC—3′序列被限制酶切出的黏性末端可用DNA连接酶连接

D．只有用相同的限制酶处理含有目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒;6.下面是四种不同质粒的示意图,其中ori为复制必需的序列,AmpR为氨苄青霉素抗性基因,Tetr为四环素抗性基因,箭头表示同一种限制酶的酶切位点。下列有关叙述正确的是A.基因AmpR和Tetr是一对等位基因,常作为基因工程中的标记基因

B.质粒指细菌细胞中能自我复制的小型环状的DNA和动植物病毒的DNA

C.限制酶的作用部位是DNA分子中特定的两个核苷酸之间的氢键

D.用质粒4将目的基因导入大肠杆菌,该菌不能在含四环素的培养基上生长;培育转基因抗虫棉的具体操作步骤:;基因工程的一般操作程序主要包括四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。;（一）目的基因的筛选与获取;;2、获取目的基因的