2025版高考生物一轮总复习选择性必修3第10单元生物技术与工程第6讲基因工程的基本工具课件.pptxVIP

第6讲基因工程的基本工具;考情研读·备考定位;考点一重组DNA技术的基本工具;必备知识·夯实基础;2．重组DNA技术的基本工具

(1)限制性内切核酸酶(也称“限制酶”);(2)DNA连接酶;(3)载体;思|维|辨|析

易错整合，判断正误。

(1)限制酶能够识别双链DNA分子中特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的氢键断开。()

(2)限制酶在识别序列中心轴线两侧将DNA分子的两条链分别切开形成的是黏性末端，在识别序列中心轴线处切开形成的是平末端。()

(3)基因工程中用到的工具酶有限制酶、DNA连接酶、载体。()

(4)质粒上标记基因的存在，是便于重组DNA分子的筛选。();延|伸|探|究

1．限制酶来源于原核生物，为什么不能切割自己的DNA分子？原核生物中存在限制酶的意义是什么？

提示：原核生物中限制酶的作用是切割外源DNA以保证自身安全，防止外来病原物的危害。限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。

2．DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？

提示：不是。DNA连接酶连接的是两个DNA片段，而DNA聚合酶是把单个的脱氧核苷酸连接到已有的DNA片段上。;3．天然的DNA分子是否可以直接用作基因工程载体？为什么？

提示：不可以。具有能自我复制、有一个或多个限制酶切割位点、有标记基因及对受体细胞无害等特点的DNA分子才可以直接用作基因工程的载体。实际上天然的DNA分子一般不完全具备上述条件，往往需经过人工改造后才能用于基因工程操作。;剖析难点·考点突破;2．图解限制酶的选择原则

(1)不破坏目的基因原则：如图甲中可选择PstⅠ，而不选择SmaⅠ。

(2)保留标记基因、启动子、终止子、复制原点原则：质粒作为载体必须具备标记基因，所以所选择的限制酶尽量不要破坏这些结构，如图乙中不选择SmaⅠ。;(3)确保出现相同黏性末端原则：通常选择与切割目的基因相同的限制酶，如图甲中PstⅠ；为避免目的基因和质粒自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，如图甲也可选择PstⅠ和EcoRⅠ两种限制酶。;特别提醒：(1)限制酶是一类酶，而不是一种酶。

(2)将一个基因??DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端或平末端。

(3)限制酶在识别序列中心轴线两侧切开形成的是黏性末端，而在识别序列中心轴线处切开形成的是平末端。;3．与DNA有关的几种酶的比较 ;?;考向围绕基因工程的基本工具，考查科学思维

(2024·江苏盐城调研)图甲、乙中的箭头表示三种限制性内切核酸酶的酶切位点，AmpR表示氨苄青霉素抗性基因，neo表示新霉素抗性基因。下列叙述错误的是()

;A．在构建重组质粒时，可用PstⅠ和HindⅢ切割质粒和外源DNA

B．在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因

C．若只用PstⅠ处理质粒和外源DNA分子片段，无法避免自身环化和反向连接

D．导入重组质粒的大肠杆菌可以在含氨苄青霉素的培养基中生长;解析：切割目的基因时，用BamHⅠ切割会破坏目的基因，只用PstⅠ切割目的基因和质粒载体，会出现目的基因和质粒的自身环化，或目的基因和质粒的反向连接，而用PstⅠ和HindⅢ进行酶切，能确保目的基因和质粒的正向连接，并且质粒上保留新霉素抗性基因作为标记基因，A、C正确；在酶切过程中，不能破坏质粒中全部的标记基因，至少需保留其中的一个，B正确；用PstⅠ切割后，质粒上氨苄青霉素抗性基因被破坏了，导入重组质粒的大肠杆菌不可以在含氨苄青霉素的培养基中生长，D错误。;根据质粒的特点确定限制酶的种类

;〔变式训练〕(2021·全国乙卷)用DNA重组技术可以赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人类需要的生物产品。在此过程中需要使用多种工具酶，其中4种限制性内切核酸酶的切割位点如图所示。;回答下列问题：

(1)常用的DNA连接酶有E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。上图中_______________酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNAl连接酶连接。上图中______________________________酶切割后的DNA片段可以用T4DNA连接酶连接。

(2)DNA连接酶催化目的基因片段与质粒载体片段之间形成的化学键是_______________。;(3)DNA重组技术中所用的质粒载体具有一些特征，如质粒DNA分子上有复制原点，可以保证质粒在受体细胞中能____________；质粒DNA分子上有___________________________，便于外源DNA插入；质粒DNA分子上有标记基因(如某种抗生素抗性基因)，利用抗生素可筛选出含质粒载体的宿主细胞，方法是___________