[药动学] 实验1 大鼠口服给药药动学实验.docxVIP

【疑问回答】

血浆样品中加入甲醇的作用是什么？

用HPLC法测定药物浓度时，蛋白质会沉积在色谱柱上发生堵塞，严重影响分离效果。因此为了防止分析仪器的污染、劣化，提高测定灵敏度、准确度、精密度和选择性，必须进行除蛋白等前处理。常用的预处理方法有有机破坏法、盐析、加热、加酸等。本次实验加入甲醇的目的是将药物与蛋白质分离开以避免损坏色谱柱。

若实验过程中产生溶血会对实验结果有影响吗？

不影响。与药物结合的血浆蛋白主要有三种：白蛋白主要与血浆中的弱酸性药物结合，α1-酸性糖蛋白主要与血浆中的弱碱性药物结合，脂蛋白主要与血浆中的脂溶性药物结合。此外β、γ球蛋白主要与内源性生物活性物质结合。对乙酰氨基酚为弱酸性、脂溶性药物，主要与白蛋白和脂蛋白结合。溶血使血红蛋白释放，不与对乙酰氨基酚结合。故溶血不会影响实验结果。

【思考题】

简述血药法在药动学研究中的意义。

药物的药理效应往往与到达作用部位的药物浓度及维持时间密切相关，又因为绝大多数药物需经血液循环达到作用部位，而药物在血液和组织中往往保持着动态平衡和定量关系，所以血药浓度与药理作用有密切的相关性。如果想按照作用部位药物浓度水平定量设计给药方案，必须掌握药物在ADME过程中血药浓度的变化规律。药物动力学就是运用数学原理，研究体内药量（主要是血中药量）的经时变化规律，并用数学语言加以描述，即用一定的数学公式或坐标图象，来表示体内药量（或血药浓度）和时间之间的函数关系。这种函数图线称之为血药浓度时间曲线，简称药-时曲线。药物动力学中常用的基本概念如房室模型、速率常数、生物利用度、表观分布容积、生物半衰期等均是建立在血药法下。

血浆样品处理方法有哪些？

去除蛋白质

在测定血样时，首先应去除蛋白质。去除蛋白质可使结合型的药物分离出来，以便测定药物的总浓度；去除蛋白质也可预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成，以及可以保护仪器性能（如保护HPLC柱不被污染），延长使用期限。去除蛋白法有加入与水相混溶的有机溶剂、加入中性盐、加入强酸、加入含锌盐及铜盐的沉淀剂、酶解法等。

缀合物的水解

尿中药物多数呈缀合状态。一些含羟基、羧基、氨基和巯基的药物，可与内源性物质葡萄糖醛酸形成葡萄糖醛酸甙缀合物；还有一些含酚羟基、芳胺及醇类药物与内源性物质硫酸形成硫酸酯缀合物。由于缀合物较原型药物具有较大的极性，不易被有机溶剂提取。为了测定尿液中药物总量，无论是直接测定或萃取分离之前，都需要将缀合物中的药物释出。有些药物仅需较温和条件即可使药物游离，有些则需较剧烈的方法，常用酸水解或酶水解的方法。

分离、纯化与浓集

提取法是应用最多的分离、纯化方法。提取的目的是为了从大量共存物中分离出所需要的微量组分——药物及其代谢物，通过溶剂的蒸发使样品得到浓集。提取法包括液-液提取法（LLE）和液-固提取法（LES）。

化学衍生化

分离前将药物进行化学衍生化的目的是：使药物具有能被分离的性质；提高检测灵敏度；增强药物的稳定性；提高对光学异构体分离的能力等。

建立和验证生物样品分析方法包括哪些内容？

一个生物分析方法的主要特征包括：选择性、定量下限、响应函数和校正范围（标准曲线性能）、准确度、精密度、基质效应、分析物在生物基质以及溶液中储存和处理全过程中的稳定性。有时可能需要测定多个分析物。这可能涉及两种不同的药物，也可能涉及一个母体药物及其代谢物，或一个药物的对映体或异构体。在这些情况下，验证和分析的原则适用于所有涉及的分析物。

对照标准物质：①在方法验证中，含有分析物对照标准物质的溶液将被加入到空白生物基质中。此外，色谱方法通常使用适当的内标。②应该从可追溯的来源获得对照标准物质。应该科学论证对照标准物质的适用性。分析证书应该确认对照标准物质的纯度，并提供储存条件、失效日期和批号。对于内标，只要能证明其适用性即可，例如显示该物质本身或其相关的任何杂质不产生干扰。③当在生物分析方法中使用质谱检测时，推荐尽可能使用稳定同位素标记的内标。它们必须具有足够高的同位素纯度，并且不发生同位素交换反应，以避免结果的偏差。

隔室模型和统计矩方法在药动学实验结果评价方面的作用分别是什么？

隔室模型的定义与分类将整个机体（人或其他动物）按药物转运速率特征划分为若干个独立的隔室，这些隔室连接起来构成的一个完整的系统，反映药物在机体的动力学特征，称为隔室模型。机体给药后药物立即分布至全身各体液和组织中，并在体内迅速达到动态平衡，此时整个机体可视为一个隔室，称为单室模型或一室模型。双室以上的模型称为多室模型，它把机体看成由药物转运速率不同的多个单元组成的体系。隔室的划分具有客观性和相对性。药物在体内的动态过程是有一定规律的，可通过一种最佳的房室模型和参数反映其体内过程，此即为房室模型客观性。同一药物用不同的房室模型处理，得到的药物动力学参数不同；由于