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Article
NickingEndonuclease-MediatedVectorConstruction
StrategiesforPlantGeneFunctionalResearch
QiGong1,2,3,†,BinWang1,2,3,†,XubiaoLu3,†,JiantaoTan1,3,YukeHou1,3,TaoliLiu1,3,
Yao-GuangLiu1,2,3,*andQinlongZhu1,2,3,*
1StateKeyLaboratoryforConservationandUtilizationofSubtropicalAgro-Bioresources,Guangzhou
510642,China;gongqi@(Q.G.);wbin313@(B.W.);TJT@(J.T.);
houyuke@(Y.H.);liutaoli@(T.L.)
2GuangdongLaboratoryforLingnanModernAgriculture,Guangzhou510642,China
3CollegeofLifeSciences,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China;
lxbiao648@
*Correspondence:ygliu@(Y.-G.L.);zhuql@(Q.Z.);
Tel.:+86-20(Y.-G.L.);+86-20(Q.Z.)
†Theseauthorscontributedequallytothispaper.
SupplementaryMaterials:
SupplementalFigureS1.SchematicdiagramofpRNAi-NEvectorconstruction.(A)pRNAi-NEwas
constructedbasedonpYLRNAi2.0vectorthroughmodifiedGibsoncloning[13].(B)Overlappong
PCRamplificationofNE-RNAifragment.(C)ColonyPCRofpRNAi-NEusingprimesFi-1andP4
lisedinTableS1.(D)DigestionidentificationofpRNAi-NEwithBamHI.
SupplementalFigureS2.Zero-backgroundcloningofintron-containinghairpinRNA(ihpRNA)
constructs.(A)ColonyPCRidentificationofpRNAi-GFPbyamplifyingsenseGFPfragment.(B)
ColonyPCRidentificationofpRNAi-GUSbyamplifyingsenseGUSfragment.(C)ColonyPCR
identificationofpRNAi-NbPDSbyamplifyingsenseNbPDSfragment.(D)ColonyPCRidentification
ofpRNAi-OsPDSbyamplifyingsenseOsPDSfragment.(E)BamHI-digestionidentificationof
pRNAi-GFP,pRNAi-GUS,pRNAi-NbPDSandpRNAi-OsPDSplasmids.Allprimersusedinclonly
PCRarelistedinTableS1.
SupplementalFigureS3.CloningandidentificationofpYLCRISPR/Cas9Pubi-T5sconstruct.(A)
SplicingfivesgRNA
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