植物组织培养的一般技术.ppt

无菌操作第31页,共36页，2024年2月25日，星期天大量元素母液的配制大量元素母液浓度一般为原培养基浓度的10、20或50倍，有时也可用l00倍，倍数不宜过高，也不宜过低。有时将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。将全部大量元素配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表中顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀。称量大量元素的化合物用感量为0.01克的扭力天平即可。第32页,共36页，2024年2月25日，星期天微量元素母液的配制微量元素母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。一般将微量元素分别称量溶解，贮存在一个瓶个，但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。称量微量元素化合物宜用感量为0.0001g的电子分析天平。第33页,共36页，2024年2月25日，星期天铁盐母液配制培养基中的铁盐母液一般单独配制目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物配制时，用感量为0.01g的扭力天平称取第34页,共36页，2024年2月25日，星期天植物生长调节物质母液的配制植物生长调节物质如生长素类(IAA，NAA)和细胞分裂素类(KT，BA)，可根据需要，灵活设计其浓度，一般为0.01，0.1、0.2、0.5和2mg/L。一般用感量为0.0001g的电子分析天平称量。IAA要用棕色瓶，暗中贮存，以免光照分解。第35页,共36页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第36页,共36页，2024年2月25日，星期天关于植物组织培养的一般技术植物组织培养的一般技术操作技术培养基的成分及作用培养基的种类与选择培养基的配制方法第2页,共36页，2024年2月25日，星期天操作技术洗涤灭菌无菌操作培养容器封口物的种类及制作第3页,共36页，2024年2月25日，星期天灭菌有菌的范畴：凡是暴露在（未经处理的）空气中的物体，曾经接触过自然水源的物体，至少它的表面，毫无例外都是有菌的。它的内部在未经证实之前，也应该作为有菌物体来看待。无菌的范畴：经过高温灼烧或蒸煮过后的物体，经其他物理或者化学灭菌方法处理过后的物体，是无菌的。高层大气、岩石的内部，健康的动物和植物不与内外部表面接触的组织内部很可能是无菌的。强酸强碱、化学灭菌剂等表面和内部是无菌的。无菌的世界远远小于有菌的世界！第4页,共36页，2024年2月25日，星期天灭菌培养基的灭菌不耐热的物质将采用过滤灭菌玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌布制品采用高压灭菌其他植物材料的表面灭菌第5页,共36页，2024年2月25日，星期天培养基的成分及作用在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分：大量元素微量元素铁盐有机成分琼脂糖植物激素PH其它成分第6页,共36页，2024年2月25日，星期天大量元素植物所需要的元素，其浓度大于0.5毫摩尔/升应该属于大量元素大量元素包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等九种元素，他们占植物干重的百分之几十到万分之几生理作用：1）参与肌体构造；2）构成一些特殊的生理活性物质；3）电化学方面的作用:维持离子浓度平衡，胶体稳定，电荷平衡；4）发育方面起的作用：影响植物组织形态发生、器官形成。第7页,共36页，2024年2月25日，星期天微量元素植物所需要的元素，其浓度小于0.5毫摩尔/升应该属于微量元素。微量元素包括Fe、Cu、Mo、Zn、Na、Mn、CoB和I等，通常培养基中添加10-7—10-5就可满足需要生理作用：酶的催化、细胞分化和维持细胞完整机能等方面第8页,共36页，2024年2月25日，星期天多年的研究结果：Cu有促进离体根生长的作用；Mo是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素，也是固氮酶的组成部分，还有防止叶绿素受破坏的作用；Mg、Zn、Na是酶的组成成份，也有防止叶绿素破坏的作用；Mn与植物的呼吸作用和光合作用有关；B与糖的运输、蛋白质的合成有关。第9页,共36页，2024年2月25日，星期天当缺乏某种元素时，往往会表现一些缺素症：缺N：某些组织呈现鲜艳的花色素苷的色彩，导管不能形成；缺N、P、K：细胞变得肥肿而形成层组织减少；缺S：产生非常明显的黄萎病；缺Fe：细胞分裂停止；缺B：细胞分裂和细胞生长延缓；缺Mn或Mo：生长受影响。第10页,共36页，2024年2月25日，星期天铁盐采用硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠结合成螯合铁配置而成作用：促进细胞的分裂与生长；影响叶绿体的结构组成与叶绿素的形成。第11页,共36页，2024年2月