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枸杞中5种黄酮类化合物的测定液相色谱法

1范围

本文件规定了枸杞中5种黄酮类化合物含量的液相色谱法。

本文件适用于枸杞中杨梅素、二氢杨梅素、木犀草素、柚皮素、芸香柚皮素含量的测定和确

证。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，

注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最

新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

样品经甲醇水溶液提取，超声离心，采用液相色谱仪测定，外标法定量。

5试剂和材料

除另有说明，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈(CHCN)：色谱纯。

3

5.1.2甲醇(CHOH)：色谱纯。

3

5.2试剂配制

5.2.170%甲醇溶液：准确移取700mL甲醇（5.1.2）至1000mL容量瓶中，用水定容。

5.3标准品

5.3.1杨梅素（CAS号：529-44-2）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标

准品。

5.3.2二氢杨梅素（CAS号：27200-12-0）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证

书的标准品。

5.3.3木犀草素（CAS号：491-70-3）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的

标准品。

5.3.4芸香柚皮素（CAS号：14259-46-2）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证

书的标准品。

5.3.5柚皮素（CAS号：480-41-1）：纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标

准品。

5.4标准溶液制备

5.4.1标准储备液（10mg/mL）：准确称取适量的标准物质（5.3），分别用甲醇（5.1.2）

制备浓度为10mg/mL的标准储备液。标准储备液在-18℃及以下避光保存。

5.4.2混合标准中间液（1mg/mL）:吸取上述标准储备液（5.4.1）各1mL于10mL容量瓶

中，用水稀释至刻度，摇匀，制备浓度为1mg/mL混合标准中间液。

5.4.3标准系列工作液：移取适量混合标准中间液（5.4.2），用70%甲醇溶液（5.2.1）稀

释成浓度为1.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL、100.0μg/mL的

混合标准工作溶液。临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱仪：带紫外检测器或二极管阵列检测器。

6.2分析天平：感量为0.00001g和0.01g。

6.3高速离心机：15000r/min。

6.4涡旋混合器。

6.5超声波振荡器。

6.60.45μm滤膜。

7分析步骤

7.1试样制备

取约200g样品于匀浆机中匀浆。制得样品在-18℃下保存。

7.2试样的提取

称取5g（精确至0.01g）试样于50mL塑料离心管中，加入20mL70%甲醇溶液

（5.2.1），涡旋混匀1min，超声提取20min。转入25mL容量瓶中，用70%甲醇溶液

（5.2.1）定容至刻度并充分混匀后，转入离心管，15000r/min离心5min，取上清液过0.45

μm滤膜，滤液待上机测定。

7.3液相色谱参考条件

a)色谱柱：C8色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）,或同等性能色谱柱；

b)柱温：35℃；

c)检测波长：290nm（芸香柚皮素、柚皮素、二氢杨梅素），260nm（杨梅素、木犀

草素）；

d)进样量：10μL；

e)流速：1.0mL/min；

f)流动相A：水，流动相B：乙腈（5.1.1）。梯度洗脱条件见表1。

表1流动相梯度洗脱条件

时间/min流动相A/%流动相B/%