1.2.2微生物的选择培养和计数（含视频）（教学课件）- 高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptx

PCR是一种在体外DNA复制的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。1973年，科学家在美国黄石国家公园的热泉中筛选出耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。科学实例：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。耐高温的酶耐高温生物体耐高温环境（热泉、火山口）寻找寻找寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。(1)筛选思路：(2)启示：

2启示：根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。耐寒微生物耐热微生物石油分解菌同理：人为提供有利于目的菌生长的条件（包括营养、温度和PH）等，同时抑制或阻止其他微生物生长。选择培养基适用实验室微生物的筛选

第一章发酵工程第2节微生物的选择培养和计数杆菌球菌霍乱弧菌葡萄球菌

一、选择培养基1.概念:2.类型:在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。类型条件分离得到的菌种改变培养条件70～80℃的高温添加某种化学物质加入青霉素高浓度食盐特殊碳、氮源石油是唯一碳源营养缺陷不加碳源不加氮源水生栖热菌酵母菌、霉菌等真菌金黄色葡萄球菌能消除石油污染的微生物自养型微生物固氮菌

1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物计数：测定分解尿素的细菌的数量用平板划线法接种培养结果的图片如下。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？不能，平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的时候也会杀死一部分菌类。

二、微生物的选择培养1g土壤中有多少能分解尿素的细菌？分离：获得分解尿素的细菌的纯培养物计数：测定分解尿素的细菌的数量稀释涂布平板法——将菌液进行一系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基的表面，进行培养。原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。稀释涂布平板法系列梯度稀释涂布平板

将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水90mL无菌水10g①铲取土样，将样品装入纸袋中注意：取土样用的小铁铲和盛土样的的纸袋在使用前都要灭菌注意：移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成1.样品的稀释：

2.涂布平板操作：①取0.1mL菌液滴加到培养基表面②将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中③将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀

稀释涂布平板法稀释涂布平板法操作的注意事项：⑴各操作细节要保证“无菌”，所有操作都应在酒精灯火焰旁进行。⑵将涂布器浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。（3）不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。

样品的稀释涂布平板微生物的培养与观察土壤取样取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽，涂布器冷却后，再进行涂布。用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。每个稀释度下应涂布几个平板？为什么？

3.培养并观察培养基菌落：待涂布的菌液被后，将平板，放入30-37℃中培养d，在涂布有菌液的平板上就可以观察到分离的。培养基吸收倒置恒温培养箱1~2合适浓度单菌落恒温培养箱细菌一般选用104、105、106稀释倍数的菌液进行涂布培养

1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL无菌水90mL无菌水10g计算公式：M代表稀释倍数C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)1克样品中的菌落数＝(C÷V)×M

平板划线法稀释涂布平板法关键操作接种工具菌体获取优点缺点接种环在固体平板培养基表面连续划线接种环在具有显著的菌落特征的区域挑取菌体操作简单，可以根据菌落的特点获得某种微生物的单细胞菌落不能对微生物计数①一系列的梯度稀释②涂布平板操作从适宜稀释度的平板上的菌落中挑取菌体既可以获得单细胞菌落，又