原子力显微镜.ppt

轻敲工作模式的特点（1）轻敲模式的分辨率和接触模式一样好。（2）对于一些与基底结合不牢固的样品，轻敲模式与接触模式相比，很大程度地降低了针尖对表面结构的“搬运效应”。（3）样品表面起伏较大的大型扫描比非接触式的更有效。（4）较软及粘性较大的样品，应尽量选择轻敲模式。第29页,共46页，2024年2月25日，星期天AFM假象在所有显微学技术中，AFM图像的解释相对来说是容易的。光学显微镜和电子显微镜成像都受电磁衍射的影响，这给它们辨别三维结构带来困难．AFM可以弥补这些不足，在AFM图像中峰和谷明晰可见．AFM的另一优点是光或电对它成像基本没有影响，AFM能测得表面的真实形貌．尽管AFM成像简单，AFM本身也有假象存在．相对来说，AFM的假象比较容易验证．下面介绍一些假象情况：第30页,共46页，2024年2月25日，星期天1.针尖成像：AFM中大多数假象源于针尖成像．针尖比样品尖锐时，样品特征就能很好地显现出来。相反，当样品比针尖更尖时，假象就会出现，这时成像主要为针尖特征．高表面率的针尖可以减少这种假象发生．AFM假象第31页,共46页，2024年2月25日，星期天2.钝的或污染的针尖产生假象：当针尖污染或有磨损时，所获图像有时是针尖的磨损形状或污染物的形状．这种假象的特征是整幅图像都有同样的特征。AFM假象第32页,共46页，2024年2月25日，星期天3.双针尖或多针尖假象：这种假象是由于一个探针末端带有两个或多个尖点所致．当扫描样品时，多个针尖依次扫描样品而得到重复图像。AFM假象第33页,共46页，2024年2月25日，星期天4.样品上污物引起的假象：当样品上的污物与基底吸附不牢时，污物可能被正在扫描的针尖带走．并随针尖运动，致使大面积图像模糊不清。AFM假象第34页,共46页，2024年2月25日，星期天5.样品-针尖间的作用力太小：探针不能顺利地扫描样品而出现横向拉伸现象。此时可以通过调节振幅衰减量来调节作用力。AFM假象第35页,共46页，2024年2月25日，星期天在核酸研究中的应用（1）对DNA分子的成像及其自组装研究1992年，Bustamante等利用AFM得到分辨率达分子级水平的可重复质粒DNA图像，并可估算分子宽度和高度，这是原子力显微镜研究生物大分子的一项重大突破。第36页,共46页，2024年2月25日，星期天（2）AFM不仅可以研究整个复合物分子立体结构和空间构象，同时还可以利用某些特殊抗体蛋白或RNA分子在缓冲体系中与DNA相互作用过程中重要结构参数变化来探究DNA区域分子构型，这是DNA研究的一个热点。（3）利用AFM可以控制生物大分子，调整生命的遗传与死亡规律，也可以在纳米尺度内将染色体的单拷贝基因复制扩增，切割剔除异常的碱基对，引起病理变化的逆转。在核酸研究中的应用第37页,共46页，2024年2月25日，星期天在蛋白质研究中的应用⑴在蛋白质单分子外形上的应用如在质子泵和离子泵研究上的应用；在与光合作用相关蛋白质研究方面的应用等。⑵在蛋白质表面物理特性研究上的应用如对蛋白质表面的粘弹性的研究；蛋白质静电特性的测量。⑶对蛋白质结构的研究如对蛋白质的抗体标记或酶消化的鉴定；多肽末端移除的鉴定和多肽环置换或移出的鉴定等。第38页,共46页，2024年2月25日，星期天⑷在蛋白质的功能特性方面的应用例如，Daniel等应用AFM在纳米分辨率上显示了膜蛋白的时间依赖性构象变化及聚集运动，成为经典的研究方法。⑸对蛋白质单分子操纵人们通过AFM操纵可以直接检测到该结构域的力学稳定性。AFM成像与操纵的联合使其能够宏观地从单分子尺度上对生物系统进行精确和可控的修饰和研究。在蛋白质研究中的应用第39页,共46页，2024年2月25日，星期天活细胞与微生物结构动态研究中应用(1)细胞或各种微生物表面结构成像AFM现已广泛用于观察各种细胞的表面结构，如血红细胞、神经细胞、上皮细胞等。(2)对细胞间的相互作用进行观察例如可研究动物胚胎移植中细胞的免疫排斥反应，病变细胞与健康细胞间的相互作用等。(3)识别正常细胞和癌细胞AFM会赋予一个表明细胞柔软度的数值。研究人员发现，尽管正常细胞的硬度各有不同，但癌细胞比正常细胞要柔软得多。第40页,共46页，2024年2月25日，星期天AFM与其他技术联用（1）AFM