第34章 DNA的复制和修复课件.ppt

第34章DNA的复制和修复;DNA复制

DNA修复合成

反转录

DNA的体外复制：分子克隆（PCR）。;;;;;;?单链DNA首先复制合成双链的复制型（单链DNA复制时，通常先形成双链复制型，再进行半保留复制）。

无论是复制、转录或逆转录，在形成双链螺旋分子时都是通过碱基配对来完成的。;;1.设计实验证明DNA是半保留复制

-2012大连理工大学生物化学

2.猪流感病毒HRN1是反转录病毒，试想出实验方案以阻止病毒在细胞内复制而不影响细胞内DNA正常复制

-2012山东大学生物化学

3.简述MettewMeselson和FranklinStahl设计了一个什么样的实验,证实DNA的复制是半保留复制;思考题;（二）、半不连续复制（P418）;;;思考题;;;;;;;思考题;思考题;思考题;二、DNA复制的起点和方式;思考题;复制的类型和方式;复制的类型和方式;首先将E.coli染色体，切成1%染色体长度的片段，分别进行（分子杂交），后放射自显影;复制的方向判断;DNA复制起点的特点;;特殊的复制方式—滚环复制;滚环复制;复制的类型和方式—滚环复制;特殊的复制方式-D环复制;?D-环扩充越过被取

代链的复制起点；

?被取代链启动复制，方向与第一条链相反；

?两条链的合成没有冈崎片断

;特殊的复制方式-2D环复制;复制的类型和方式—多复制叉复制;真核生物DNA的复制;;;三、DNA复制有关的酶及蛋白质因子;需4种dNTP（不是dNDP、dNMP、NTP）

需DNA模板

需引物(DNA、RNA)

5`→3`方向越长

（化学合成方向与此相反） ;;思考题;思考题;2.大肠杆菌的DNA聚合酶;（1）.大肠杆菌的DNA聚合酶I;DNA复制过程中碱基对受双重校对;3→5外切酶活性——校对作用;DNA聚合酶I的部分水解;DNA聚合酶I的特点;DNA聚合酶I的功能;（2）.大肠杆菌的DNA聚合酶Ⅱ;(3).大肠杆菌的DNA聚合酶Ⅲ;DNA聚合酶Ⅲ全酶;大肠杆菌的三种DNA聚合酶小节;（4）大肠杆菌DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ.;连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，形成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成完整的链。反应需要提供能量

能量：细菌的连接酶利用NAD+。

能量：动物和噬菌体的连接酶利用ATP;酶;ThereactioncatalyzedbyDNAligase;细菌的连接酶只能连接碱基互补基础上双链中的单链缺口，不能连接单独存在的DNA或RNA单链。若DNA两股都有单链切口，只要缺口前后碱基互补也可连接

DNA连接酶在复制、DNA修复、重组、剪接中均起缝合缺口作用，是重要的工具酶之一。;4.引物酶(primerase)（P419）;引物酶(primerase);引物酶;

DNA复制为什么要用引物？（为什么DNA聚合酶要用引物，RNA聚合酶不需要引物？为什么引物为RNA?）

⑴从模板复制最初几个核酸时，碱基堆集力和氢键都较弱，易发生错配

⑵新复制的最初几个核苷酸，没有与模板形成稳定双链，DNA聚合酶的3，→5，校对功能难发挥作用。;5.DNA复制的拓扑异构性质;DNA复制的拓扑异构性质;TypeItopoisomerases;TypeItopoisomerases;细菌中的旋转酶;Topoisomerasesasdrugtargets:;6.DNA解螺旋酶（解旋酶，解链酶）;7.单链DNA结合蛋白;四、原核生物DNA复制的过程;E.coli复制起始点—oriC的序列特征;原核生物DNA复制起始的相关蛋白质;DNA复制的起始;DNA复制的起始;复制的起始;研究发现大肠杆菌DNA复制唯一一个受到调节的阶段为起始阶段，DNA的甲基化与细菌质膜的的作用可以影响复制起始的时间，DNA复制的发动与DNA甲基化和细菌质膜有关。

大肠杆菌复制起点叫oriC，由245bp构成，在oriC中有11个含4bp的回文序列“GATC”，Dam甲基化酶