培养基的配制、分装、灭菌.ppt

培养基的配制、分装、灭菌;二.实验材料;（一）培养基的制备

（1）培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合

成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材

料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微

生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和

配制方法。

（2）制备流程：

称量→溶解→蒸煮→调pH→分装→包扎→灭菌;固体分装;6）加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脱脂棉)制作的棉塞。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3／5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。

7）包扎加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。

8）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经灭菌后，必须放37℃温室培养24h，无菌生长者方可使用。

;;（4）关键步骤及注意事项

①要严格按配方配制。

②调pH不要过头。

③干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC以下放物、取物。

④高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。;（二）灭菌

灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。

（1）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温

至160oC，恒温1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用

具等的灭菌。

（2）高压蒸汽灭菌法（一般121oC，30min，适用培养基）：

把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进

行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上

升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055公斤/厘

米2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121oC。在这种

情况下，微生物（包括芽孢）在15～20分钟便会被杀

死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等

面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭??时

间。;高压蒸汽灭菌法

1．加水将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的

水，以水面与三角架相平为至。

2．装料将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培

养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶

壁，以防冷凝水沾湿棉塞。

3．加盖将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌

桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧

相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；

4．排气加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔

排出。一般认为，当水沸后约5min，表明锅内空气已排

净。

5．升压当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始

上升。

;6．保压当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。

开始计时并维持压力至所需时间。本实验用121℃，

20min灭菌。

7．降压达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下

降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅

盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。

8．无菌检查将已灭菌培养基于37℃培养24h，无杂菌生

长，即可待用。;（3）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天

蒸煮1次，每次煮沸1h，连续3d重复进行。在每两次蒸

煮之间，将物品（指培养基）放在37oC恒温条件下培养

过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成

营养体，以便下次蒸煮时杀灭。

（4）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质

量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来

杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风

味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在

62℃，30分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学

家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。