发文章斑马鱼动物伦理材料.pdf

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发文章斑马鱼动物伦理材料

斑马鱼作为一种新兴的重要模式动物之一,体外受精、胚胎透明,

因此可在显微镜下直接观察发育过程及检测药物引起的内脏组织变

化,在生命科学领域中应用前景十分广阔。斑马鱼体型小,适合高通

量研究,还具有生长繁殖周期短及其与人类高度相似的基因组等优点,

已经广泛用于人类疾病模型的建立、新药研发和药物的筛选,此外,

斑马鱼还被应用于毒理学、发育生物学和遗传学等的研究。因为斑马

鱼对污染物反应灵敏,现已用于监测环境污染物及污水检测。本文主

要从几个方面对斑马鱼的研究进展进行了整理和归纳。

关键字:斑马鱼模式动物科学研究发育感染药物又名蓝条鱼、花

条鱼、蓝斑马鱼、印度鱼、印度斑马鱼,产于孟加拉、印度东部、巴

基斯坦、缅甸、尼泊尔等地,是一种常见的热带淡水硬骨鱼。属辐鳍

鱼纲鲤科。斑马鱼身体细长,呈纺锤形,成鱼体长约4-6cm,因全身布

满深蓝色条纹似斑马样而得名。斑马鱼雌雄鉴别容易,雄鱼体型细长,

颜色偏黄,条纹较为显著,纵纹为柠檬色;雌鱼身体肥胖,颜色较淡,

纵纹呈蓝色加银灰色,在性成熟后腹部肥大。

雌鱼每次可产卵300多枚,鱼卵易收集,其胚胎透明,繁殖能力

强且生长发育速度快,对饲养要求低,可高密度饲养,与其他实验动

物相比有很大优势,是一种非常受欢迎的实验动物模型。近三十年来,

已有约20个斑马鱼品系的基因数据库资料,全球已有超过1500个斑

马鱼实验室,而我国也有超过250个实验室利用斑马鱼开展相关研究。

英国桑格研究所(TrustSangerInstitute)于2013年完成了斑马

鱼的参考基因组,研究人员在此基础上比较了斑马鱼与人类基因组的

异同,并进行了系统性的全基因组分析.在此综合近几十年的研究,

在胚胎及遗传发育学、基因组学、药物筛选、疾病模型的建立等方向

探讨斑马鱼的研究成果及进展。

1.胚胎及遗传生物学方向

斑马鱼的发育分为6个阶段:卵裂期,囊胚期,原肠胚期、分裂

期、成形期和孵化期。斑马鱼属于体外受精动物,胚胎在体外发育且

胚胎透明,发育过程可以直接连续的观察,是研究胚胎发育和遗传生

物学的理想模式,解决了小鼠胚胎期变化不易观察的自身缺陷。斑马

鱼产卵量高,成熟周期短,可人为控制产卵过程,发育过程又可在体

视显微镜下观察,在研究试验中有很大便利。

1981年美国遗传学家George等人在《Nature》上发表文章,详

述了斑马鱼受精卵的变化过程及卵裂方式,首次将斑马鱼用于发育生

物学和遗传生物学的研究,开启了斑马鱼的研究热潮,此后相继有学

者借助斑马鱼开展了心血管及血液系统的发育遗传学研究,发现斑马

鱼心血管系统早期发育与人类极为相似,心血管系统有缺陷的突变体

可长期存活,这为心血管发育遗传学研究提供了有利的条件。此外,

运用正向遗传法和反向遗传法可以推导出斑马鱼的遗传发育途径,利

用x-ray、乙烷亚硝基脲(ENU)或反转录病毒感染造成基因组突变

再多次子代筛选所得的正向遗传学材料对于遗传发育机制的研究十

分有利。“抑制技术”可快速以反向遗传学的方法验证基因的功能,

注入的会在整个胚胎形成期比较有效和稳定的发挥作用。

2.基因组学方向

斑马鱼的基因组有约30000个基因,与人类基因有87%的相似性,

目前已获得较为完整的基因组学资料,基因组全系列测序已经完成,

功能基因组学的研究也成为一大热点。现已从斑马鱼上克隆到许多人

类基因,并且具有相似的功能。

突变基因

斑马鱼容易得到突变品种,很多突变系都具有与人类疾病相似的

临床症状,可以得到相应的人类疾病模型,对于很多疾病发病机制有

了新的研究转机。插入突变可以很大程度的提高突变基因的克隆速度。

现已通过反转录病毒介导的插入突变技术在斑马鱼已得到许多影响

胚胎发育和细胞生长的基因,并找到了对应的基因。反转录病毒介导

的整合插入技术很适合获得转基因突变体斑马鱼,1994年Lin等首

次报道了以莫洛尼氏鼠白血病病毒(MurineLeukemiaVirus,)为

基础,使用疱疹性口炎VG糖蛋白,包被的伪型反转录病毒对斑马鱼

囊胚显微注射,从而得到的外源性DNA整合的转基因斑马鱼。但是反

转录病毒的注射同时会增加个体自发突变的几率,约有1/4的基因突

变不是前病毒的插入突变造成的,因此还需要判断突变发生的原因。

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