29-病毒的细胞接种增殖技术.ppt

病毒的细胞接种增殖技术1.细胞的标准易感、无外源性微生物污染·宿主动物细胞如，猪甲状腺细胞培养猪传染性胃肠炎病毒·非宿主动物细胞如，鸭胚成纤维细胞培养马立克氏病病毒。病毒的细胞接种增殖技术2.影响病毒在细胞中增殖的因素（1）血清维持液中血清含量：一般不超过2%（2）温度最适温度多为37℃。有些病毒生长的最适温度高于或低于37℃。如，狂犬病病毒为32℃（3）pH维持液PH值一般为7.6-7.8病毒的细胞接种增殖技术（4）接毒量维持液体积的1%-10%，科学的接种量应以TCID50为依据。（5）接毒方法异步接毒细胞长成单层后倒去生长液，接种病毒，37℃吸附一定时间后加入维持液，多数病毒采用此种方式。同步接毒在种植细胞的同时或种植4小时内接种病毒，主要用于在细胞有丝分裂盛期进行复制的病毒，如，细小病毒。病毒的细胞接种增殖技术3.病毒增殖的判断指标细胞病变效应（CPE）细胞圆缩细胞聚集形成合胞体轻微病变倒置显微镜接种单纯疱疹病毒1型的人角膜上皮细胞（CPE）（A-正常细胞，B-感染后8h，C-感染后12h，D-感染24h）病毒的细胞接种增殖技术病毒的细胞接种增殖技术4.病毒的收获一般在CPE达80%左右时收获。通过冻融、超声波等方式破碎细胞，使病毒充分释放，再去除细胞碎片。病毒液于-20℃以下保存。细胞结合型病毒，收获感染细胞直接于液氮中保存。