27-细胞的冻存与复苏.ppt

细胞的冻存与复苏二倍体细胞株与传代细胞系需液氮（-196℃）保存。为保持细胞的最大活率，一般采用慢冻快融法。细胞在液氮中可贮存3～5年,但为妥善起见,每冻存1年应再复苏1次。细胞的冻存与复苏1.细胞的冻存消化细胞，将细胞悬液收集至离心管中。1000r/min离心10min，弃上清液。沉淀加含保护剂（二甲基亚枫）的培养液，计数，将细胞调整至5×106个/ml左右。将悬液分至冻存管中，每管1ml。将冻存管口封严。如用安瓿则需火焰封口。贴上标签，写明细胞种类、冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳，以便取出时方便。细胞的冻存与复苏1.细胞的冻存温度梯度降温：室温，4℃（20min），冰箱冷冻室（30min），低温冰箱（-80℃，1h），气态氮（30min），液氮。操作时应小心，以免液氮冻伤。定期检查液氮，随时补充，绝对不能挥发尽。细胞的冻存与复苏2.细胞的复苏冻存管从液氮中取出后，迅速置于37～40℃水浴1min。将细胞悬液于1000r/min离心10min，弃上清。沉淀加10ml培养液悬浮后，再离心10min，弃上清。将细胞转移至培养瓶，37℃培养，第2天观察生长情况。