重组DNA技术的基本工具.pptxVIP

;基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术,赋予生物新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看，由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术。;;思考：1.为什么不同生物的DNA分子能拼接起来？

2.为什么一种生物的基因可以在另一种生物细胞内表达？;“分子手术刀”;1.全称和简称：全称——______________；简称——_______

2.来源：主要是从中分离纯化出来的，迄今已经从近300多种不同的微生物中分离出约4000种限制酶。;;4.作用部位：;5.识别序列:大多数限制酶的识别序列由___个核苷酸组成，也有少数限制酶的识别序列由___个、___个或__________的核苷酸组成。;6.切割结果：DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——________和_______

*当限制酶在它识别序列的___________将DNA分子的两条链分别切开时，产生的是_________；

*当限制酶在它识别序列的________切开时，产生的是_______；;（1）实例1——EcoRⅠ限制酶切割

*EcoRⅠ识别序列为GAATTC

*EcoRⅠ切割部位为GA之间的磷酸二酯键;（2）实例2——SmaⅠ限制酶切割

*SmaⅠ识别序列为CCCGGG

*SmaⅠ切割部位为CG之间的磷酸二酯键;现学现用：写出下列限制酶切割形成的黏性末端

BamHⅠ________EcoRⅠ________

HindⅢ________BglⅡ________;1.要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？;旁栏思考（P71）：根据你所掌握的知识，你能推测这类酶存在于原核生物中的作用是什么吗？;生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。这样，尽管细菌中含有某种限制酶，也不会使自身的DNA被切断，并且可以防止外源DNA的入侵。;;缺口怎么办？;将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，形成重组DNA分子。;两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来;可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，;（2）T4DNA连接酶可把平末端??间的缝隙“缝合”起来，效率低;CTTCATG;;3.DNA连接酶、DNA聚合酶、限制酶、解旋酶的比较;[资料4]1973年，美国科学家科恩（S.Cohen)等人从大肠杆菌中提取出了两种质粒，一种含有卡那霉素抗性基因，另一种含有四环素抗性基因。他们将这两种基因分别“切割”下来，并拼接在同一个质粒上，然后导入大肠杆菌，产生了既抗卡那霉素又抗四环素的大肠杆菌。;1.作用：;1.作用：;3.质粒特点;4.运载体需具备的条件;;思考·讨论构建重组DNA分子(EcoRⅠ切割);…TATCGTACGATAGGTACTTAA;…TATCGTACGATAGGTACTTAA;重组DNA分子;1.剪刀和透明胶条分别代表哪种“分子工具”?;思考：课后题拓展应用2（2）

不同的限制酶切割可能产生相同的黏性末端，这在基因工程操作中有什么意义？;思考：基因工程中的载体和载体蛋白是一回事吗？;思考：如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢?;;;结果分析与评价

1.你提取出白色丝状物或沉淀物了吗？用二苯胺试剂鉴定的结果如何？

2.你能分析出粗提取的DNA中可能含有哪些杂质吗？

3.与其他同学提取的DNA进行比较，看看实验结果有何不同，分析产生差异的原因。;进一步探究

本实验只是对DNA进行了粗提取，请在阅资料，了解实验室提取纯度较高的DNA的一种方法，并与本实验中所使用的方法进行比较，总结两种方法的异同。;1.DNA连接酶是重组DNA技术常用的一种工具酶。下列相关叙述正确的是（）

A.能连接DNA分子双链碱基对之间的氨键

B.能将单个脱氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯键

C.能连接用同种限制酶切开的两条DNA片段，重新形成磷酸二酯键

D.只能连接双链DNA片段互补的黏性末端，不能连接双链DNA片段的平末端;2.在重组DNA技术中，将外源基因送入受体细胞的载体可以是（）

A.大肠杆菌的质粒

B.切割DNA分子的酶

C.DNA片段的黏性末端

D.用来识别特