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碳酸酐酶及其研究进展

碳酸酐酶(carbonicanhydrase,CA)是一种锌酶。在哺乳动物中,几乎所有的组织都可检测到CA。CA至少有14种同工酶[1],其结构、动力学性质、对抑制剂的敏感性、组织内的分布以及亚细胞的定位都有不同,它能参与机体气体运输、酸碱调节和组织的分泌等功能,在维持内环境的稳定方面发挥着重要作用。

1933年，人们已从血液中提取出了碳酸酐酶，直到1940年才在动物红细胞研究中确定碳酸酐酶含有锌。它是红细胞中仅次于血红蛋白的蛋白质组分。人和动物血液中的碳酸酐酶相对分子量约30KDa，由单一肽链组成，每个分子含一个Zn(II)离子，酶蛋白约含260个氨基酸残基，其中脯氨酸含量最高，没有二硫键。碳酸酐酶有多种同工酶，它们不仅选择性识别HCO2-和CO2作为催化底物和产物，

也不规律地识别磷酸酯|羧酸酯|醛类等分子[2]。.

1、CA的分布

根据碳酸酐酶氨基酸序列的不同,人们主要将其分为α、β、γ、δ、ε五种不同类型的酶。其中α-CAs存在于脊椎动物、细菌、藻类及绿色植物的胞浆中；β-CAs存在于高等植物及藻类叶绿体中,对植物光合作用过程中CO2的获取及CO2浓度的维持有着必不可少的作用;γ-CAs则主要存在于太古细菌及一些细菌中；δ-CAs主要存在于海洋硅藻中；ε-CAs是近年来才确定的类型,主要存在于蓝细菌及一些化能自养型细菌中。多年来人们对碳酸酐酶的研究主要集中在与人类关系密切的α-CAs和β-CAs上。α-CAs在氨基酸序列上存在20~60%的同源性,哺乳动物的几乎所有组织中都含有参与机体多种生命活动的α-CAs。目前的研究表明，α-CAs至少存在14种不同的同工酶：CAIIII，CAVII及CAXIII为胞浆酶；CAIV，CAIX，CAXII和CAXIV为膜连接酶；CAV为线粒体酶；CAVI则存在于唾

液中；另外还有3种已知的非催化形式的碳酸酐酶相关蛋白(CARelatedProtein，CARP)—CARPVIII，CARPX及CARPXI[3]。

在人体中，CAI,CAII和CAIII为细胞质酶。CAI存在于红细胞、胃黏膜上皮细胞中,慢收缩骨骼肌细胞中存在CAIII。CAII存在于胃肠道、肾、附睾、快收缩骨骼肌细胞、破骨细胞、脑脉络丛及眼部细胞内。CAIV,CAIX,CAX,CAXII锚合于细胞膜,但酶发挥作用的部位是细胞外。CAIV存在于胃肠道、肾、附睾、输精管、骨骼肌、皮下平滑肌、脑毛细血管上皮细胞、心肌及眼部毛细血管、肝、泪腺等处。在人类组织中CAXII表达于肾[4]、结肠、前列腺、胰腺、卵巢、睾丸、肺、脑中。此外，在哺乳动物肝的线粒体中存在高活性的CAV[5]，1987年从唾液中纯化分泌型酶CAVI，在唾液腺和小脑浦肯野氏细胞可见CAVII。近年来发现肿瘤组织内存在CA的同工酶[6]，不同的肿瘤组织有不同的CA同工酶表达，如CAIX和CAXII在胃癌中表达,乳腺癌中，CAIX表达与其预后有关[7]。CAII是人类研究最为广泛，也最为深刻的CA同工酶。

2、CA的结构

在CA活性中心存在一个Zn原子,对于CA的催化活性来说是必需的。在CAI和,CAII中Zn原子以单体形式存在,在CAIII中以二硫键相连的二聚体形式存在。以碳酸酐酶II为例，其含有260个氨基酸残基、分子量为29246Da，活性中

心含有催化所必需的Zn2+的金属酶。Liljas等于1972年首次得到了人类碳酸酐酶II(hCAII)的X晶体结构衍射图,Eriksson及Hakansson等又分别于1988年、1992年对其结构进行修正,得到了更高分辨率的hCAII的X晶体结构图。

晶体结构研究显示人碳酸酐酶2（hCAII)的活性中心：由三个组氨酸残基

（His-94，His-96和His-119），和一个水分子与一个锌原子配位所形成的一个畸变四面体结构所组成[2]。附近有一个由Val-142，Val-121，Trp-209和Leu-198所构成的疏水口袋和由Thr-199和His-64所组成的一个质子转移通道，如图1所示。

图1.人碳酸酐酶2（hCAII)活性中心示意图

在CAII的空间结构中,只有位于酶分子N末端，约由24个氨基酸残基组成的区域与酶呈松散连接,除此之外,整个CAII分子近似于球形,体积大小约5nm×4nm×4nm。其主要二级结构为位于酶分子中的10条β-链,由于它们的存在,使得该酶被分为两个部分,酶分子中与其活性相关的许多关键氨基酸残基位点都位于该结构中。除β-链结构外,酶分子表面还分布有一些相对较