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显微镜油镜的使用
验证型
1实验目的
1.巩固普通光学显微镜的使用方法
2.学习并掌握油镜的原理及使用方法
3.观察常见微生物的形态
2实验原理
•普通光学显微镜利用光学原理把人眼所不能分辨的微小物体放大成
像,以供人们提取微细结构信息。
阿贝显微镜成像理论
•德国物理学家、光学家恩斯特·阿贝
首先从光的衍射角度研究显微镜物镜
成像过程,通过大量的实验,观察显
微镜物镜焦平面上的衍射图样,提出
显微镜物镜的二次衍射成像理论,
•并提出:
1.显微镜的分辨率存在上限,
2.微镜的分辨率和光的波长、显微镜
物镜孔径的关系式:σ=λ/(2NA)
分辨率σ的计算公式
1.σ=λ/(2NA)
2.σ=0.61λ/NA
3.σ=1.22λ/(NA(obj)+NA(cond))
•公式(1)用于自然光照明的显微镜,(2)、(3)用于电光源的
显微镜。
•σ为分辨率;λ为光线的波长;NA为物镜的数值孔径
(NA=nsina/2,n为介质的折射率,a为孔径角,即样品对物镜孔径角)
提高显微镜分辨率的方法:
•增大物镜的数值孔径
在物镜和盖玻片之间充以n较大的油,如香柏油n=1.52,不仅使n
增大,而且孔径角也增大。
•用短波长的光照射,如紫外光显微镜,电子显微镜。
•油镜的透镜很小,光线通过玻片与油镜头之间的空气时,因介质密
度不同,发生折射或全反射,使射入透镜的光线减少,物象显现不
清。
•若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率(n=1.52)相近的香柏
油(n=1.515),则使进入透镜的光线增多,视野亮度增强,使物
象明亮清晰。
3实验器材
•显微镜
•香柏油、二甲苯
•擦镜纸
•细菌三型、放线菌、青霉、黑曲霉装片
4实验步骤
由十到百
先升后降
物像置中
(1)显微镜的放置与调节
•将显微镜置于平稳的实验台上,调节瞳距、光线亮度至合适
(2)低倍镜观察
•在载物台上放置标本,将镜头切换为低倍镜;
•将载物台升至最高;
•从目镜观察,将欲观察位置移至物镜正下方,适当缩小光圈,转动
粗调节器渐升降至发现物像时,改用细调节器调节到物像清楚为止。
•移动装片,把合适的观察部分移至视野中心.
(3)油镜观察
•下降载物台,将油镜转至正下方。在玻片标本的镜检部位滴上一小滴香柏油。
滴油
•从侧面注视,小心慢慢上升镜筒,使油镜浸入油香柏油中,镜头贴近装片。
下镜
•从目镜观察,旋转细调节器将载物台徐徐下降,直至视野中有物像为止。
寻像
•观察完毕,上旋镜筒。先用擦镜纸拭去镜头上的油,然后用擦镜纸蘸少许二
擦油甲苯(擦去镜头上残留油迹,最后再用干净擦镜纸擦去残留的二甲苯。
•将各部分还原,反光镜垂直于镜座,将接物镜转成八字形,再向下旋。同时
复位把聚光镜降下,以免接物镜与聚光镜发生碰撞危险。
(3)高倍镜观察
•(适用于真核生物观察,代替油镜)
•眼睛离开目镜从侧面观察,旋转转换器,将高倍镜转至正下方,注
意避免镜头与破片相撞。
•再用目镜观察,仔细调节光圈,使光线的明亮度适宜。用细调节器
校正焦距使物镜清晰为止。
4实验结果
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