《现代分子生物学》第八讲-分子-....pptVIP

第八讲分子生物学研究方法

〔二〕DNA分析技术;本章主要内容：;DNA分析技术〔续〕;一、核酸分子杂交技术;一种常见的染色体病的检测;12weeks;荧光原位杂交检测;荧光原位杂交;核酸分子杂交的根本原理;核酸分子杂交:用标记的DNA或RNA片段〔探针〕来检测样品中未知核酸序列，通过核苷酸间碱基互的原那么发生异源性结合，再经显影或显色的方法，将结合核酸序列的位置或大小显示出来。

待测的核酸序列，可以是克隆的基因片段，也可以是未克隆化的基因组DNA和组织细胞的RNA。;探针的标记;

核酸探针的类型：

寡核苷酸探针

基因组DNA探针

cDNA探针

RNA探针

单链DNA探针

;标记物;常用的探针标记物：;探针的标记的方法

1)切口平移：利用DNA聚合酶I的特点;2〕随机引物延伸法

人工合成的6个核苷酸残基的寡核苷酸片段，4096种排列顺序，klenow大片段作为聚合酶。;3〕末端标记法;;4〕体外转录法;核酸分子杂交及检测;1、变性：

在某些理化因素的作用下，核酸双链分子碱基对的氢键断裂，疏水作用被破坏，双链螺旋或发夹结构被拆开，有规那么的空间结构被破坏，形成单链分子，称为核酸的变性。;2、复性;3、杂交;核酸分子杂交

↓

固相杂交液相杂交

印迹杂交原位杂交

SouthernNorthern整体原位切片及细胞原位

;固相支持物的选择;印迹方法;;;;核酸分子杂交;洗膜与检测;;5、原位杂交;;6、整体原位杂交

最初用于研究Drosophila胚胎，接着Xenopus胚胎〔Hemmati-Brivanlouetal.1990;FrankandHarland1991)等模式生物。研究动物胚胎发育过程中基因的时空表达及其基因功能的重要手段之一。

优点：

有利于研究基因和胚胎器官或组织形成之间的关系；

更直观的了解基因何时、何处在胚胎中表达。;应用：;显微、亚显微水平的基因表达定位;病原的检测;转基因的检测;Expressionofcrescent,frzb-1,sfrp-2andsizzledinXenopusembryosbywhole-mountinsituhybridization.