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最低抑菌浓度(MIC)测定

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环丙沙星：

管号

原液

0

13

12

11

10

9

8

7

6

5

4

3

2

1

浓度(ug/ml)

3200

1600

800

400

200

100

50

25

12.5

6.25

3.12

1.56

0.78

0.4

0.2

取量(μl)

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

→

200

溶剂(μl)

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

200

抗菌药物梯度培养皿的制备

培养皿编号：按各抗菌药物浓度编号。

将配制好的各抗菌药物工作液150μl加到各培养皿中，与15ml50℃预温的培养基充分混匀，平放在超净台内，半开培养皿盖至培养基凝固后，用塑料袋密封保存于4

菌悬液接种与培养

多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理，其他配件用酒精消毒处理；使用前必须确认完全烘干。

按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿，接种菌后置超净台内直至菌悬液渗入。

置35℃～36℃、5%～10%CO2

记录放置时间。

培养18～24小时观察结果。

结果判读

观察细菌生长情况：

记录结果读取时间。

在适宜的光线下，观察对照培养皿的菌落生长情况，并对所有菌株进行初步鉴定（涂片染色和氧化酶试验）。

比较观察对照平皿和抗菌药物平皿，进行判读：接种点内有1个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点内无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。

MIC判读与记录：

MIC是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为?g/ml。

记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况，在《WHO参考菌株及MIC实验结果记录表》用（+）表示生长，（-）表示无生长。

每批实验结果必须由另外一名技术人员复读、签字，以确保结果的准确性。

参考菌株的判读：

本次测定的参考菌株MIC值在标准MIC值范围内或在标准MIC值±1个浓度范围内表明本次试验有效。

本次测定的参考菌株MIC值超出上述范围则表明本次试验无效，需重新配制抗菌药物平皿和测定。

?－内酰胺酶测定

纸片酸度定量法

将一小片滤纸置于空平皿中：

让滤纸吸足青霉素液（pH值8.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液100ml+0.2g溴甲酚紫+5g无缓冲剂的结晶青霉素）：

用接种环将10～20个菌落涂到滤纸上，涂膜直径约为5mm，35℃

观察结果：产生?－内酰胺酶的淋球菌使滤纸颜色由紫变黄。

产色头孢菌素法

将头孢硝噻吩纸片置于空平皿中，用接种环将菌落涂到纸片上，3分钟内观察有无颜色变化，变红者为?－内酰胺酶阳性。

附件3.5

WHO参考菌株及淋球菌临床分离株MIC实验结果记录表

记录时间：实验人员：核读人员：

①青霉素（P），②四环素（T）及?－内酰胺酶：

平皿号

P1

P2

P3

P4

P5

P6

P7

P8

P9

P10

P11

T1

?－内酰胺酶

浓度(?g/ml)

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.5

1

2

4

8

8

A

B

C

D

E

１

２

合计

③大观霉素（S）：

平皿号

S1

S2

S3

S4

S5

S6

S7

浓度（μg/ml）

2

4

8

16

32

64

128

A

B

C

D

E

1

2

合计

④头孢曲松（CE）:

平皿号

CE1

CE2

CE3

CE4

CE5

CE6

CE7

CE8

CE9

CE10

浓度（μg/ml）

0.002

0.004

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.50

1

A

B

C

D

E

1

2

合计

⑤环丙沙星（CI）：

平皿号

CI1

CI2

CI3

CI4

CI5

CI6

CI7

CI8

CI9

CI10

CI11

CI12

CI13

浓度(?g/ml)

0.002

0.004

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.50

1

2

4

8

A

B

C

D

E

1

2

合计

附件3.6

淋球菌临床分离株对各监测药物MIC结果统计表

①青霉素：

浓度(?g/ml)

0.0078

0.0156

0.0312

0.0625

0.125

0.25

0.5

1

2

4

8

总数

菌株数

②四环素/?－内酰胺酶:

浓度(?g/ml)

8

?－内酰胺酶

总数

菌株数

③大观霉素：

浓度(?g/ml)

2

4

8

16

32

64

128

总数