食品快速检测技术—分子生物学快速检测技术.pptx

荧光定量PCR原理;基本概念;;;1.扩增曲线（primarycurve）;2.荧光阈值（threshold）;3.Ct值(CycleThreshold);Ct值(CycleThreshold);;

;在扩增产物达到阈值线时:

XCt=X0(1+Ex)Ct=M(1)

XCt:荧光扩增信号达到阈值强度时扩增产物的量.

在阈值线设定以后,它是一个常数,我们设为M

方程式(1)两边同时取对数得:

logM=logX0(1+Ex)Ct(2)

整理方程式(2)得:

logX0=-log(1+Ex)*Ct+logM(3)

Log浓度与循环数呈线性关系，根据样品扩增达到域值的循环数即Ct值就可计算出样品中所含的模板量;;扩增曲线;确定未知样品的C(t)值

通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量;2.相对定量;;成立条件：假设扩增效率为100%

满足条件：1）内参基因和目标基因的扩增效率接近

2）内参基因和目标基因的扩增效率均为90%-110%

假设条件：内参基因和目标基因扩增效率差异大于5%

1）优化实验条件，使扩增效率接近

2）使用其他方法

;

待测样品目的基因浓度

待测样品内参基因浓度

F=对照样品目的基因浓度

对照样品内参基因浓度;环介导等温

扩增技术原理;概念;;;引物设计;引物设计;

;;1.基本原理;;（1）内引物FIP的F2与其模板的互补序列F2c结合，在BstDNA聚合酶作用下，从F2的3’末端开始启动DNA合成，合成一条以FIP为新的DNA单链并与模板链结合形成新的双链DNA。;（2）以F3为起始合成的新链与模板链形成双链。而原合成的以FIP为起始的DNA单链被置换而脱离产生一单链DNA，其在5’末端F1c和F1区发生自我碱基配对，形成茎环状结构。?;（3）引物BIP的B2与模板链B2c区互补配对，合成以BIP为起始的新链，并与模板链互补形成DNA双链。同时，F端的环状结构将被打开，外引物B3与模板上B3c杂交后，以其3’末端为起点也开始合成新链，并使以BIP为起始的DNA单链从模板链上脱离下来，形成以FIP和BIP为两端的单链。因为B1C与B1互补，F1C与F1互补，两端自然发生碱基配对，这条游离于液体中的DNA???链分别在F和B末端形成两个茎环状结构，于是整条链呈现哑铃状结构，此结构即为LAMP的基础结构。;

;环介导等温扩增技术（LAMP）简介;等温扩增技术简介;;1.概念;2.优点;3.种类;各类等温扩增技术的比较;

;;1.优势;2.缺陷;;实时荧光核酸恒温扩增（SAT）技术;简介;;1.SAT的概念;2.产生的背景;2.产生的背景;2.产生的背景;2.产生的背景;3.特点;3.特点;3.特点;;SAT与PCR技术原理比较

;;1.CT/NG尿液检测;2.结核分枝杆菌检测;3.其他应用;生物芯片;生物芯片简介;;1.概念;2.发展历史;2002年;3.现状;4.应用;4.应用;;1.基因芯片;2.蛋白质芯片;3.芯片实验室;;1.芯片制备;;生物芯片的制备所依赖的正是集成电路工业中应用十分成熟的微加工（Microfabrication）技术。;;2.样品处理;3.生物分子反应;4.信号的检测与分析