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不规则抗体筛选操作规程

一．试剂和仪器

1.抗人球蛋白（IgG,C3b/C3d）多特异检测试剂卡或抗人球蛋白

（IgG）单特异检测试剂卡。

2.上海血液生物医药有限公司3%抗筛试剂红细胞悬液

3.离心机和孵育器

二．标本收集与处理

1．血清或血浆都可以使用。

2．如果在直接抗人球蛋白实验中加入了血浆标本，因为钙离子的

失活，补体依赖的抗体可能无法检测出来，所以建议使用血清标本。

三．操作步骤

1．取出试剂卡，平衡至室温；使用前离心确保无气泡和断层。

2．观察卡的反应液面高度，确保试剂液面高于凝胶平面3mm左右，

否则请勿使用；撕开试剂卡上的锡纸，撕开后的微柱请于1小时内进

行下面操作。

3.分别向反应柱内加入50ul患者血清或血浆。注意，加样时，

吸头请勿触及微柱管壁。

4．再分别向反应柱内加入10ul3%红细胞悬液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ(抗筛红

细胞)。

5．观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，

使反应物混匀。

6．在孵育仓中37℃孵育15分钟。

7．用离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。

8.从微柱正反两面判读并记录结果。

四．结果判读

阳性结果（＋）：红细胞凝集为阳性结果。

阴性结果（－）：无溶血及红细胞未凝集为阴性结果。

溶血会导致玻璃珠上方呈粉红色或红色。如果发现溶血现象，则应

先将血清或血浆置于56℃水浴30min以灭活补体，然后再重复试验，

观察红细胞凝集现象。

4+反应：红细胞在柱中玻璃珠上面凝集，并形成一个环形带。

3+反应：发生凝集的大部分红细胞停留在玻璃珠的上半部分。

2+反应：发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少

量细胞。

1+反应：大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠床的下半部分，柱的

底部有少量红细胞。

阴性反应：所有红细胞均穿过玻璃珠床，在柱的底部形成一个平整

的红细胞聚集带。

五.注意事项

1.试剂卡应保存在2～25℃，请勿冷冻保存；请勿将试剂卡放入自

动除霜的冰柜中，也不要放在离热源很近或阳光直射的地方。如果试

剂卡放在冰箱中，使用前应先恢复至室温。

2.卡中液体试剂的冻结或蒸发都有可能影响未凝集红细胞通过玻璃

珠到达微柱底部；另外细菌污染也有可能引起假阳性结果。

3.红细胞悬液的配制请参阅说明书要求。

4.微柱中加入样本或试剂时，请注意以下几点

1）加样枪的位置：加样枪枪头应与微柱管壁保持大约45度角，并

避免直接接触。

2）操作之前请详细阅读试剂使用说明书，加样量要准确。

5.反应结果应双面判读。

6.质控管：用于阴性质控，即用微柱中的试剂进行平行试验，正常情

况下未发生凝集反应的红细胞在微柱中能够顺利通过玻璃珠之间

的间隙到达底部，否则说明这张卡或红细胞本身有质量问题。

如质控管是阳性结果，提示试验结果应进一步分析。

7.如果试剂卡出现以下结果后，请按要求处理，必要时经销商联系：

1）正常情况下，微柱中的液面应高于玻璃珠水平面3mm左右，当

微柱中试剂液面等于或低于玻璃珠水平面时，请不要使用此卡。

2）由于运输原因，导致试剂盒倒臵时间过长，可能会在试剂或微

柱中出现气泡。操作人员取卡时如果发现有气泡，可将卡垂直向

上，用手轻弹，把气泡弹出，如果气泡过大不能弹出，可用离心

机离心一次，即可将气泡清除。

3）如果试剂卡有明显损坏（微柱裂开或锡纸裂开等），试剂中有明

显的颗粒物质，请不要使用。

（注：专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分

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