流式细胞术原理及树突状细胞的检测.ppt

流式细胞术原理及树突状细胞的检测概念流式细胞术（FlowCytometry，FCM）利用流式细胞仪对处在快速、直线、流动状态中的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速定量分析，同时对特定群体加以分选的现代细胞分析技术。流式细胞仪（FlowCytometer)使细胞（或其他粒子）以单个方式依次高速通过激发光束，采集细胞被光照时产生的各种信号，对信号进行处理，并对各参数进行关联分析的一种仪器。功能特点EpicsXL-ADC:最经典的分析型台式小机型:世界上第一台单激光四色机型，全矩阵荧光补偿，数字式流式细胞仪

EpicsAltra：最方便稳定的分析型分选型兼顾的大型流式分选机：最稳定、最灵活的高活性收获细胞的分选机

CytomicsFC500－最新的包含多种高新技术的多色分析机：第一台单激光5色机型，高灵敏度，全自动化设置

检测对象临床研究基础研究基本原理FLOWCELLInjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluidFLOWCYTOMETRY(FCM)PMTAMPcomputerLINLOGLASERSAMPLESIGNAL常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发射波长(nm)用途颜色FITC488525免疫荧光绿色PE(RD1)488575免疫荧光橙色ECD488620免疫荧光橙红PeCy5488675免疫荧光深红PI488620DNA染色橙红滤片带通滤片BANDPASS(BP)只允许某些波长的光通过二向色性滤片DICHROICFILTER一定波长以上通过，该波长以下折射630nmBandPassFilterTransmittedLightWhiteLightSource620-640nmLightDichroicFilter/Mirrorat45degReflectedlightTransmittedLightLightSourceOPTICS细胞分选系统FluorescenceActivatedCellSorting488nmlaser+-ChargedPlatesSinglecellssortedintotesttubesFALSSensorFluorescencedetector信号直方图(HISTOGRAM)与

点图(DOTPLOT)FLCOUNTFL1FL2HISTOGRAMDOTPLOTGATE设门界定分析区域：REGION十字门：QUA矩形门：REC自由门：AMO线性门：LIN建立直方图之间的关系AAA方案PROTOCOL免疫荧光(IMMUNOPHENITYPING)

单标记参数：FSLin,SSLin,FLLog直方图：同型对照(ISOTYPE)：同抗体类型、同荧光染料非抗人SSFSFLCOUNT11024AASAMPLE+ISOTYPESAMPLE+CD4免疫荧光(IMMUNOPHENITYPING)

双标记参数：FSLin,SSLin,FL1Log,FL2LOG直方图：同型对照颜色补偿FSSSFL1FL2FL2COUNTCOUNTFL1AAAA111110241024光谱交叉荧光补偿PMT1放大1PMT2放大2FL!FL!FL2FL2全矩阵颜色补偿最先进的方法是利用软件进行全矩阵颜色补偿（任何两个荧光检测通道之间都可以进行补偿）树突状细胞流式检