DPPH自由基SOP分析和总结.docx

DPPH

DPPH自由基SOP

主要目的：

——为了测定样品清除DPPH自由基的能力。

主要原理：

——自由基清除剂与DPPH单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用酶标仪进行快速的定量分析。

实验室签章

一、 试剂

——1,1-二苯基-1-苦味肼基自由基（DPPH）

——甲醇（分析纯）

二、 仪器设备

——96孔酶标板

——UV-Vis可见多功能酶标仪

——移液枪

——200μL量程枪头

三、 实验方法

前期准备

配置2g/L的DPPH甲醇标准溶液。

DPPH自由基清除能力

参照Brand-Williams(1995)[1]报道的方法，将其稍加改动后应用在96孔酶标板中[2]。在酶标板的每孔中，依次加入不同体积（10、20、30、40、50、60、70、80、90和100μL）的样品溶液和200μL的DPPH标准溶液（2g/L），最后用甲醇溶液补齐至总体积300μL。

室温反应30min后，于515nm下用UV-Vis可见多功能酶标仪测定其吸光度（EL340,Bio-TekInstruments,Inc.,Winooski,VT,USA）。番茄样品消除自由基的能力表示为EC50（清除1μgDDPH至50%所需的样品用量（μg干重））。

EC50越小，表示抗氧化活性越高。平行测定三次，取平均值计算。

清除DPPH自由基能力用如下公式计算：

清除率%=（1-Ai Aj）×100%

Ac

其中：Ai为样品溶液加DPPH试剂混合液的吸光度，Aj为样品溶液加甲醇的吸光度，Ac为DPPH溶液加样品溶剂的吸光度。

Brand-WilliamsW,CuvelierME.BersetC.Useofafreeradicalmethodtoevaluateantioxidantactivity[J].LWT-FoodScienceandTechnology,1995,28(1):25-30.

VermaAR,VijayakumarM,RaoCV.MathelaCS.InvitroandinvivoantioxidantpropertiesandDNAdamageprotectiveactivityofgreenfruitofFicusglomerata[J].FoodandChemicalToxicology,2010,48(2):704-709.