单基因病诊断详解.pptx

单基因遗传病诊疗;;;一病史、家族史和体症

1.病史;(1)家族史;3.生育史;4.症状和体症;因为大多数遗传病在婴儿和儿童时期即可有体症和症状出现，故除观察外貌特征外，还应该注意身体发育情况：诸如体重增加速度，智力促进、性器官以及第二性症发育、肌肉张力、婴儿啼哭声音等情况。

因为有遗传异质性，若欲作出病因诊疗，单凭体症、症状资料是非常困难，一定要进行必要试验室检验。;二、系谱分析;;一例多指（趾）系谱;一例β-地中海贫血系谱;;;2;进行系谱分析应注意问题;HbAHbAHbAHbSHbSHbS

正常人携带着患者（致死）

无有（50%）有（全部）

无有（生存力强）----;三、生物化学检验;1.代谢产物检出;2.酶和蛋白质分析;检测材料主要起源有：特定组织和细胞，如肝细胞、皮肤成纤维细胞，肾，肠粘膜细胞等。

注意问题：一个酶缺乏不一定在全部组织中都能够检测出来。比如苯丙氨酸羟化酶必须用肝组织活检，而血细胞中无法得到。;上海：1981～1987年对284,396名新生儿进行PKU筛查，查出PKU患儿15名，高苯丙氨酸血症4名。;四、基因诊疗;;1978年，KanYW——镰状细胞贫血;基因诊疗优点;基因诊疗难点：对大多数疾病还未找到适当基因诊疗方法，另外因为遗传异质性、基因突变多样性，一个基因诊疗方法对同一疾病往往有很大差异。

基因诊疗对象：普通是指单基因病和一些有主基因改变多基因病。至1997年，发觉人类单基因病遗传病已达8587种，现已到达15988种;进行基因诊疗必须具备条件：;基因诊疗方法;（一）聚合酶链反应

(polymerasechainreaction,PCR);PCR原理：

1.为可选择性扩增,要有特异引物

2.要有前身物、聚合酶和离子

3.是链式反应，每一周期经过变性、复性和延伸三步

4.一周期后DNA倍增;PCR过程：

变性（92-95；1分钟）

复性（40-60；1分钟）

延伸（72；1.5分钟）

;;

;;α1α2;Multi-PCR;PCR-SSCP;PCR-SSCP;;PCR-DHPLC

DHPLC（变性高效液相色谱）

进行基因突变检测原理

DHPLC进行基因突变检测是基于异源双链形成和不一样双链与吸附拄结合牢靠程度不一样。;一个杂合子个体，PCR产物一定含有野生型和突变型两种DNA，而且二者百分比为1:1，将PCR产物进行变性复性过程，杂交会形成同源双链和异源双链，一样，当把野生型和突变型PCR产物混合后，进行变性复性过程，杂交后会出现四种情况。;异源双链因为碱基对不匹配，在部分变性温度条件下，就会在不匹配碱基对处部分解链，因为单链DNA带负电荷降低，结协力弱，所以，异源双链比同源双链先洗脱出来，依据柱子保留时间不一样将同源双链和异源双链分离，出现不一样检测峰。;DHPLC特点：

1）快速分离DNA分子，普通进行基因突变检测，一个样品约需8.8分钟

2）自动化操作系统

3）准确测定DNA片段大小

4）基因突变检出率高，达95-100%

5）经济、操作简便、PCR产物无须进行纯化处理即可用于突变检测;（二）分子杂交;Southern印迹杂交

(Southernblothybridization)

原理:DNA碱基替换和数目标改变可造成限制性酶切片段长度改变

1.点突变至酶切位点消失或出现新切点

2.较大片段碱基缺失

3.串联重复数目较大改变

4.较大片段碱基重复;限制酶识别序列与切割：

绝大多数Ⅱ型限制酶识别序列都是回文结构,即以双对称轴按5’3’方向阅读时,其碱基次序在双链上相同

BamHⅠ识别GGATCC

5’-GGATCCATGGAACCGTAGCGGATCCTAGT-3’

3’-CCTAGGTACCTTGGCATCGCCTAGGATCA-5’

BglⅡ识别AGATCT

5’-AGATCTTACATTGGCATC