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侧流免疫层析试验试验报告

侧流免疫层析是一种基于抗原、抗体免疫反响的经典床旁检测技术。最初，争论人员承受纳米金制备层析试纸条，用于尿人绒毛膜促性腺激素检测，即我们熟知的胶体金。但检测结果依靠人工判读，且检测灵敏度低、假阴性率高。随后，一些对层析膜进展简洁图像采集、处理的仪器相继消灭，LFIA结果判读实现自动、半定量化。

近年来，LFIA不断进展，检测性能得到很大提升，已逐步向定量检测过渡，其可检测样品多样〔如全血、血浆、汗液、唾液，尿液等〕，并且能对核酸进展检测。本文综述了LFIA检测系统的争论进展以及LFIA的商品化应用现状，以期为相关领域供给参考。

一、LFIA构造及定量检测

侧流免疫层析试纸条由样品垫、结合垫、层析膜、吸水纸和聚氯乙烯底板五局部组成。单克隆抗体和二抗被预先固定在层析膜上以形成测试线或比照线，参加含待测物的样品后，待测物与结合垫上的标记抗体结合，随层析作用进一步被固定在T线上的单抗捕获。过量的标记抗体被C线上的二抗捕获，通过特定检测仪器读取T/C线上的标记物信号强度，并代入预先绘制的标准曲线，在保存LFIA优点的同时实现了LFIA对待测物的定量分析。

对于完整的LFIA定量检测系统而言，标记物、层析膜、检测仪是保障定量结果快速、灵敏、准确的根底。在近十年里，已研发出不同信号类型的灵敏标记物以及多种型层析膜材料，还设计了一系列价格合理、构造紧凑的检测设备用于免疫层析结果的记录和量化。特别地，为保证定量结果溯源性，对试验中所使用的标记物、耗材、试

剂、仪器及检测程序均可开展量值溯源工作，以使LFIA产品的检测结果溯源至国家或国际标准。可用经典的蛋白和分子检测方法，作为验证LFIA诊断效能的参比方法，如酶联免疫吸附试验和聚合酶链反响等。

LFIA实现定量检测使得检测结果不受主观因素制约，大大提高了其在即时检测领域的应用深度与广度。下文就实现LFIA定量检测的三个重要组成部件即标记物、检测仪器、层析膜以及取得的应用进展进展具体阐述。

二、LFIA检测系统进展

〔一〕高灵敏标记物

纳米标记物的成功应用使LFIA迈向定量检测的台阶，依据标记物产生的信号不同，将其大致分为三类：〔1〕有色型标记物：会产生肉眼可见的颜色；〔2〕荧光型标记物：在特定光源激发下可产生荧光；〔3〕其他标记物：包括纳米酶、磁珠等，分别产生酶学信号、磁信号。

有色型标记物：

纳米金在水溶液中由于外表静电作用呈胶体状态，具有优异的理化性质且易于功能化，是LFIA中最常用的标记物。但AuNPs存在粒径分布宽、稳定性差、储存条件高的缺乏。近年来，已有争论承受油相合成、化学键合等方法来对AuNPs进展增加、组装、聚合，如二维黑磷，改进后的AuNPs既保存了原有特性，稳定性又得到很大提升，在微量药物、病毒糖蛋白的定量检测中，显示出宽阔的应用前景。

碳纳米管是由石墨烯片组成的无缝空心管状体，具有高比外表积、良好的机械强度和化学惰性。另外，自身黑色使AuNPs具有很强

的辨识度，因此CNTs的灵敏度比AuNPs更高。但CNTs易于聚拢，几乎不溶于任何有机溶剂。在CNTs外表添加亲水性的共价官能团，可改善CNTs的溶解性局限，并获得更好的稳定性，尤其适用于小分子化合物和特定蛋白的定量检测[5]。

荧光标记物：

由于有色型标记物信号放大力量有限，现已将很多型荧光材料用于LFIA的定量检测，常用的荧光标记物有量子点、镧系元素等。

量子点是一种半导体荧光纳米晶体，荧光强度大且稳定，其发光光谱可调、狭窄、对称，适用于微量物质的检测。单一的QD经过两亲聚合物修饰后，可制备成核壳型量子点，其稳定性更好、保存期更长。在肿瘤标志物和小分子药物的检测中，检测限可低至5.8ng/ml。

以QD为标记物的LFIA，还适用于荧光猝灭的方法，较其他标记物具有更宽的线性范围，在感染性疾病诊断、肿瘤诊断试剂开发和药物监测领域前景可观。

镧系元素具有原子态放射、长荧光寿命、窄放射光谱、宽斯托克斯位移的特性，常用作基于时间区分的免疫分析，在小分子药物检测中，表现出良好的重复性，LOD比最灵敏的AuNPs低约100倍。但LE在水溶液中存在低荧光产量的缺陷，可将LE与纳米微球等载体结合，以增加荧光产量。上转发光粒子是由稀土金属元素合成的晶体材料，和其他标记物相比，UCP具有独特的上转发光现象、低背景干扰和高稳定性，格外适合于检测成分简单的样品，如尿液、唾液等。检测结果与培育法和PCR法高度全都，可在20min内检测10种食源性致病菌。

荧光微球通常由纳米微球包裹荧光材料或在其外表偶联荧光物质制备而成，具有良好的亲和性和高比外表积，目前已经制备出包含有

机染料、QD、UCP等荧光材料的FMS。但FMS