药物的含量测定—仪器分析技术（药物分析课件）.pptx

色谱分析法的含量

测定计算;;;;;;;;色谱分析法;色谱法概述;一、色谱法的起源和发展;1931年，Kuhn采用柱色谱分离了类胡萝卜素

1941年，Martin和Synge提出分配色谱法

1944年，Martin等又提出纸色谱法

1952年，Martin和James发明了气相色谱法

1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现代色谱分析的建立

1956年，Stahl系统研究了薄层色谱法;1957年，戈雷(Golay)发表“涂壁毛细管气液分配色谱理论和实践”论文，首先提出毛细管速率方程，并第一次实现了毛细管气相色谱分离。

1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析仪，确定了核糖核酸的分子结构

1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液相色谱仪

1975年，Small等提出离子色谱??;20世纪80年代，超临界色谱

20世纪90年代，毛细管电泳（1809年Re?ss第一次电泳实验）

21世纪，联用技术、大分子色谱分离、制备色谱可望取得更大的发展

;二、色谱法的分类;按两相状态不同分类;二、色谱法的分类;;二、色谱法的分类;按色谱分离过程的原理不同分类;三、色谱法的特点;色谱分析法系统

适应性试验;色谱系统适应性实验;（一）理论塔板数（n）

以被分析物主峰或规定的色谱峰计算柱效，以确定色谱峰的尖锐程度，尤其在痕量组分测定中尤为重要。

如测得n低于规定，应改变柱长或载体性能、重填色谱柱等以求达到。;（二）分离度（R）

分离度是评价相邻峰分离程度，或内标峰与主峰的分离程度，便于定量分析时确定测定结果的准确性。

除另有规定外，R≥1.5;（三）重复性（RSD）

1×5峰面积

3×3校正因子;（四）拖尾因子（T）

拖尾因子T是评价色谱的对称性，便于保证峰积分时的测量精度，尤其采用峰高法计算含量时。

除另有规定外，T应0.95~1.05;非正常峰;色谱分析法的含量测定;色谱分析法的含量测定主要指的是色谱的定量分析;按各品种项下的规定，精密称(量)取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，进样，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测物质的峰面积(或峰高)，按下式计算含量:;(１)原料药百分含量的计算公式;当分析样品不能全部出峰时，可考虑用内标法定量。

精密称(量)取???照品和内标物质，分别配成溶液，各精密量取适量，混合配成校正因子测定用的对照溶液，取一定量进样，记录色谱图。测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子:;再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，进样，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量:;按各品种项下的规定，配制供试品溶液，取一定量进样，记录色谱图。测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。要求所有组分必须有相应的色谱峰。用于杂质检查时，由于仪器响应的线性限制，峰面积归一化法一般不宜用于微量杂质的检査，只能粗略地定量。;紫外可见分光光度法;一、紫外-可见吸收光谱

物质吸收紫外或可见光引起分子中价电子跃迁、产生的分子吸收光谱称为紫外-可见吸收光谱。不同物质的分子结构不同，所产生紫外-可见光谱各有特点。;紫外-可见光谱技术特点;紫外-可见分光光度法的基本原理;2.吸光度（吸收度）A;三、光的吸收定律;朗伯-比尔定律：一束平行单色光通过一均匀、非散射的吸光物质溶液时，在入射光的波长、强度以及溶液温度等保持不变时，该溶液的吸光度A与其浓度C及液层厚度L的乘积成正比。;四、吸光系数;吸光系数的意义:

（1）一定条件下是一个特征常数。

（2）在温度和波长等条件一定时，ε仅与物质本身的性质有关，与待测物浓度c和液层厚度L无关；

（3）定性和定量分析依据：同一物质在不同波长时ε值不同。不同物质在同一波长时ε值不同。

εmax表明了该物质在最大吸收波长λmax处的最大吸光能力。