(8)--实验7 红色面包霉的杂交.ppt

实验7红色面包霉的杂交一实验目的1．了解红色面包霉的生活周期与遗传特征。2．通过红色面包霉性状遗传的杂交实验，观察分析子囊孢子的分离和交换现象，了解着丝点作图的原理与方法。3．理解三大遗传规律的普遍实用性。

二实验原理红色面包霉（Neurosporecrassa，2n=14）、粗糙链孢霉，真菌门子囊菌纲，其营养体是由单倍体（n=7）多细胞菌丝体和分生孢子所组成。红色面包霉的生活史包括无性和有性两个世代：无性世代：菌丝的有丝分裂发育成菌丝体，或由分生孢子发芽形成新的菌丝体。有性世代：两种不同生理类型（接合型）的菌丝或称不同的接合型通过融合，或异型核结合形成二倍体的合子。合子形成后立即进行减数分裂产生4个单倍体的核（四分孢子），四分孢子再经一次有丝分裂形成8个子囊孢子，并以4对“双生”，成线性排列在子囊中。

红色面包霉的赖氨酸缺陷型菌株(lys-)必须在基本培养基上补加赖氨酸才能生长，且生长缓慢迟熟，产生的子囊孢子呈灰色(-)；而野生型菌株(lys+)在基本培养基上可正常生长，产生的子囊孢子呈黑色(+)。根据子囊孢子的颜色黑色与灰色的比例或在基本培养基上孢子萌发与不萌发比例是否为1∶1可验证分离定律。

粗糙链孢霉lys+与lys-杂交子囊孢子的排列顺序(1)、(2)为非交换型(3)、（4)、(5)、(6)为交换型子囊(7)、（8)、(9)、(10)是由转换造成的异常比例

由于控制这一对相对性状的基因在染色体上的位置离着丝点较远，两种亲本杂交所产生的子囊果中将出现6种可能的子囊型，即非交换型子囊(1)、(2)和交换型子囊(3)、(4)、(5)、(6)，其子囊中子囊孢子“+”与“-”的比例为4∶4，可以以着丝点作为一个位点，估算基因lys+/-与着丝点之间的交换值，进行基因定位，该方法称为着丝点作图(centromeremapping)。但有时由于基因转换也会出现一些异常比例，如(7)、(8)的6∶2、2∶6和(9)、(10)的5∶3、3∶5。

6：2（或2：6）的子囊表明减数分裂的四个产物中，有一个产物发生了基因转换－－染色体转换（chromatidconversion）5：3（或3：5）的子囊表明有一个产物的一半出现基因转换－－半染色单体转换（half-chromatidconversion）对于以上非孟德尔比例的产生的解释是由于DNA的错配修复1、在减数分裂前期亲本染色体配对2、链的交换产生两个错配部分3、经DNA合成过程切除和修复某条单链的某部分4、产生6：2（3：1）基因转变的m+基因转变是由于重组和修复所产生

１交换未发生在着丝点与lys＋／－基因之间，由此８个子囊孢子在子囊中的排列方式为：（１）＋＋＋＋－－－－（２）－－－－＋＋＋＋２交换发生在着丝点与lys＋／－基因之间，则８个子囊孢子在子囊中的排列顺序为：（３）＋＋－－＋＋－－（４）－－＋＋－－＋＋（５）－－＋＋＋＋－－（６）＋＋－－－－＋＋基因交换发生位置及子囊孢子的排列顺序

交换值＝交换型子囊数×1/2交换型子囊数＋非交换型子囊数×100%交换型子囊的出现是由于该基因与着丝点之间发生了一次染色体片段的交换，所以从交换型子囊数占总子囊数的百分比，可以计算出该基因与着丝点间的交换值。算式如下：

三实验材料红色面包霉（N.crassa）野生型(lys+)菌株，赖氨酸缺陷型(lys-)菌株。四实验用具、药品显微镜、恒温箱、高压灭菌锅、酒精灯、三角烧瓶、试管、培养皿、载玻片、镊子、接种针、解剖针、滤纸；5%次氯酸钠、各种培养基

五实验方法1．菌种活化实验前5～7d，把冰箱中保存的野生型和赖氨酸缺陷型菌株取出进行活化。在无菌条件下，用接种环挑取少量分生孢子或菌丝体分别接种在马铃薯培养基上，置于28℃恒温箱中培养5d左右，长好的菌株在菌丝上部可见红粉状孢子。

2．接种杂交在无菌条件下(或用酒精灯火焰封口法)，用接种分别环挑取少许野生型和赖氨酸缺陷型的菌丝，接种在同一试管的杂交培养基上，贴上标签，接种后的试管放在25℃恒温培养箱中二周左右便有黑色颗粒状子囊果出现，但还没有完全成熟，到三周左右，子囊果基本成熟，可以在显微镜下观察，观察的最佳时间是杂交后的23-25天这段时间内。观察时期要掌握适当，如偏早，虽有子囊但孢子尚未成熟都呈白色。如过迟，则全为黑色，对交换型和非交换型的分类带来困难。

3．收集子囊果在长有棕黑色子囊果的试管中，加少量无菌水，摇动片刻，倒入空三角烧瓶中，加热煮沸5min，以防分生孢子飞扬。4．镜检 取一