生物化学与分子生物学基本试验试验一蛋白质的盐析与透析试验.pdfVIP

生物化学与分子生物学

基本实验

实验一蛋白质的盐析与透析

实验目的

了解蛋白质的盐析与透析的原理和意义

实验原理

血清中的蛋白质，用盐析的方法，可以分离出清蛋白、α、β球蛋白和γ-球蛋白三种。

详情见盐析技术。另选择适宜孔径的半透膜，使蛋白质分子被截留，小分子的中性盐透出而

达分离的目的。但透析时正负离子透过半透膜的速度不同，如硫酸铵中的NH+的透出较快，

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膜内SO2-剩余而生成HSO，其酸度足以使蛋白质变性，因此，除盐时开始应对0.14mol·L-1

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的NHOH透析。本实验分别用双缩脲试剂和Nessler试剂检验蛋白质和NH+的存在。

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仪器材料和试剂药品

仪器材料：（1）离心管、试管及试管架。

（2）2m1刻度吸管、玻璃棒、小烧杯。

（3）透析袋。

（4）离心机。

试剂药品：（1）饱和硫酸铵溶液。

（2）硫酸铵粉末。

（3）双缩脲试剂称取CuSO5H·O2.5g，加蒸溜水少许，微热溶解后稀释至100ml。

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另取酒石酸钾钠（NaKCHOH·O）10g和KI5g，溶于500ml蒸馏水中，再加入20％氢氧

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化钠300ml，混匀后，慢慢加入硫酸铜溶液中，加蒸馏水至1000ml。此液可长期储存。

（4）Nessler试剂称取150g碘化钾置于三角烧瓶中，加蒸馏水100ml使之溶解，再

加入110g碘，待完全溶解后加140g～150g汞，用力振摇10分钟左右，此时产生高热，须

将三角烧瓶放入水中继续摇动，直至棕红色的碘转变成带绿色的碘化汞钾为止。将上清液倾

入2000ml容量瓶中，并用蒸馏水洗涤瓶内的沉淀数次，将洗涤液一并倒入容量瓶内，用蒸

馏水稀释至刻度，此为贮存液，储于棕色瓶中备用。

取贮存液150ml，加10％氢氧化钠700ml，混匀后加蒸馏水150ml，混匀，此为应用

液，储于棕色瓶中，如混浊可过滤或静止数天后取上清液使用。本试剂需有适宜的pH值，

调节至用1mol/L盐酸20ml滴定时，需本试剂11.0ml～11.5ml时为宜。

（5）血清样本。

实验内容

1、取2m1血清加入离心管中，再加入2ml饱和硫酸铵溶液，用玻璃棒搅匀，静置5～

10分钟后，用2000rpm离心5分钟，将上清液移至另一离心管中，分次加入少量硫酸铵粉

末，并用玻璃棒搅拌至有少量硫酸铵不再溶解为止，静置5～10分钟后，同上离心，得沉淀

和上清液。

2、取在蒸馏水中煮沸约1小时的15mm×60mm透析袋一条，一端打结后检查是否漏

水，不漏则将水倒掉，加入用3ml蒸馏水溶解的第二次沉淀液，挂于盛有蒸馏水的小烧杯

中，使袋内外的液面处于同一水平，透析约30分钟，每隔10分钟更换一次透析液。

3、检查取6支试管，按下表操作。

表3-2-1

试剂管号

（滴）123456

袋内液1010————

透析液——1010——

蒸馏水——