高中生物3.2基因工程的基本操作程序知识梳理新人教版选择性必修3.docVIP

3.2基因工程的基本操作程序

一、目的基因的筛选与获得

（一）目的基因的筛选与获得

1.目的基因概念

在基因工程的设计和操作中，用于__________变更受体细胞性状__________或__________获得预期表达产物________等的基因就是目的基因（依据不同的须要，目的基因是不同的，主要是指__________编码蛋白质的基因___________）。

2.筛选目的基因的方法

（1）从相关的__________已知结构__________和__________功能清楚__________的基因中进行筛选。

（2）获得方法

①__________人工合成__________

②__________基因文库中获得目的基因__________

③__________利用PCR获得和扩增__________

3.利用PCR获得和扩增目的基因

（1）PCR的概念：PCR是__________聚合酶链式反应__________的缩写，是一项依据______DNA半保留复制______的原理，在______体外______供应参加DNA复制的__________各种组分__________与______反应条件______，对___________目的基因的核苷酸序列______进行__________大量复制__________的技术。

①全称：__________聚合酶链式反应___________

②原理：___________DNA半保留复制___________

③操作环境：__________体外（PCR扩增仪/PCR仪）___________

④目的：__________对目的基因的核苷酸序列进行大量复制___________

⑤优点：___________可以在短时间内大量扩增目的基因___________

（2）DNA体内复制的条件

参加的组分

在DNA复制中的作用

DNA母链

供应DNA复制的_____模板_____

4种脱氧核苷酸

合成DNA子链的_____原料_____

解旋酶

打开DNA双链

DNA聚合酶

催化合成DNA_____子链_____

引物

使DNA聚合酶能够从_____引物的3’_____端起先连接脱氧核苷酸

注：引物是一小段能与______DNA母链__________的一段碱基序列__________互补配对_的______短单链核酸__________。

（3）DNA体外复制（PCR）的条件

参加的组分

在DNA复制中的作用

DNA母链

供应DNA复制的_____模板_____

4种脱氧核苷酸

合成DNA子链的_____原料_____

引物

使DNA聚合酶能够从_____引物的3’_____端起先连接脱氧核苷酸

90℃以上高温

打开DNA双链（变性温度）

耐高温的_____DNA聚合酶_____

催化合成DNA子链

缓冲液（含_____Mg2+_____）

激活真核细胞和细菌的_____DNA聚合酶_____

其他不同的温度

_____变性、复性和延长_____须要不同温度

注：复制的原料实为_____dNTP_____（dATP、dTTP、dCTP、dGTP），同时水解产生能量为合成DNA子链供应能量，因此体系中不须要添加_____ATP_____。

（4）过程

目的基因DNA__________受热变性__________后______解为单链______，______引物_____与单链相应______互补序列______结合；然后以__________单链DNA__________为模板在______DNA聚合酶______作用下进行___延长____，即将4种______脱氧核苷酸______加到__________引物的3’__________，如此__________重复循环多次__________，每次循环一般可以分为_变性、复性和延长_三步。

注：

__变性___

温度上升到90℃左右，双链DNA解聚为单链

复性

温度下降到55℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合

___延长__

温度上升到72℃左右，Taq酶从引物起始合成互补链，可使新链由_____5′端向3′_____端延长

拓展：DNA复制的相关计算

1.子代DNA分子总数：_____2n_____个；

2.第n代产生的DNA数：______2n-1______个；

3.子代DNA脱氧核苷酸链总数=______2n+1_____条

4.第n代产生的DNA链数：______2n______条

①n代后，DNA分子有______2n______个

②n代后，DNA链有______2n+1______条

③第__________代出现完整的目的基因

④n代后，含引物的DNA分子有__