《猪瘟荧光 PCR 快速检测技术规范》.pdf

T/CSHB

河北省版权协会团体标准

T/CSHB0002—2024

猪瘟荧光PCR快速检测技术规范

TechnicalspecificationsforrapiddetectionofswinefeverusingPCR

2024--发布2024--实施

河北省版权协会发布

I

猪瘟荧光PCR快速检测技术规范

1范围

本文件规定了猪瘟荧光PCR快速检测技术的试剂和材料、仪器设备、样品的采集与处理、操作方法、

结果判定和存储。

本文件适用于猪瘟快速检测，适用于对临床样本中的猪瘟病毒（Classicalswinefevervirus，CSFV）

RNA进行定性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

农牧发[2019]2号生猪屠宰检疫规程

NY/T541兽医诊断样品采集、保存于运输技术规范

GB/T27540-2011猪瘟病毒实时荧光RT-PCR检测方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1扩增

指基因扩增，细胞内染色体上的某一个基因选择性地拷贝数大量增加的现象。

3.2扩增曲线

指在分子生物学实验中，通过连续监测反应体系内生物分子的浓度变化，得到的曲线图。

4缩略语

荧光PCR：荧光聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

FAM：6-羧基荧光素（6-carboxfluorescein）

CSFV：猪瘟病毒（ClassicalSwineFeverVirus）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

EDTA：乙二胺四乙酸（EthyleneDiamineTetraaceticAcid）

DEPC：焦碳酸二乙酯（Diethlpyrocarbonate）

5试剂和材料

5.1试剂

除另有说明，所有试剂均为分析纯，所有试剂均用无RNA酶的容器分装。

5.1.1PCR反应液

5.1.2阳性对照品

5.1.3阴性对照品

1

5.1.4酶混合液

5.1.475%乙醇

用新开启的无水乙醇和DEPC水配制，-20°C预冷。

5.1.5DEPC水

去离子水中加入0.1%DEPC，37°C作用1h，（121±2）°C，高压灭菌15min。

5.2材料

放血工具、离心管、一次性手套、一次性注射器、抗凝剂（柠檬酸钠：水1：10）、消毒剂、搅

拌棒、编号笔、消毒液容器、拭子等。

6仪器与设备

6.1核酸提取仪

6.2高速台式冷冻离心机

6.3冰箱：2~8°C和-20°C以下

6.4适用仪器

试剂盒适用于ABI7000/7300/7500/7900、ABIStepOnePlus、宏石SLAN-48P/96S、RochelightCycler480、

RochelightCycler96、AglientMX3000P/3005P、iCycleriQ、Bio-RadCFX96等荧光定量PCR仪。

7样品采集与处理

7.1总则

样品采集、保存与运输按照NY/T541执行，样本类型为RNA病毒，且需在提取后尽快检测。

7.2采样人员

采样人员需经过专业技术机构培训、掌握采样技术的人员实施。

7.3样品采集

7.3.1全血样品采集

生猪样品采集部位为猪耳缘静脉或前腔静脉血液，生猪采集2mL~5mL血液置于采血管（含EDTA

抗凝剂）中，密封后冷藏