第34章-DNA的复制和修复.pptVIP

第34章DNA的复制和修复;DNA复制

DNA修复合成

反转录

DNA的体外复制：分子克隆（PCR）。;;;;;;;?单链DNA首先复制合成双链的复制型（单链DNA复制时，通常先宣传双链复制型，再进行半保留复制）;1.设计实验证明DNA是半保留复制

-2012大连理工大学生物化学

2.猪流感病毒HRN1是反转录病毒，试想出实验方案以阻止病毒在细胞内复制而不影响细胞内DNA正常复制

-2012山东大学生物化学

3.简述MettewMeselson和FranklinStahl设计了一个什么样的实验,证实DNA的复制是半保留复制;思考题;;;;思考题;;;;;;;思考题;思考题;二、DNA复制的起点和方式;复制的类型和方式;复制的类型和方式;首先将E.coli染色体，切成1%染色体长度的片段，分别进行（分子杂交），后放射自显影;DNA复制起点的特点;;;复制的方向判断;特殊的复制方式—滚环复制;滚环复制;复制的类型和方式—滚环复制;?D-环扩充越过被取

代链的复制起点；

?被取代链启动复制，方向与第一条链相反；

?两条链的合成没有冈崎片断

;特殊的复制方式-D环复制;复制的类型和方式—多复制叉复制;;;三、DNA复制有关的酶及蛋白质因子;DNA聚合酶反应的特点

需DNA模板

需引物(DNA、RNA)

需4种dNTP

5`→3`方向越长

（化学合成方向相反） ;ā;思考题;思考题;2.大肠杆菌的DNA聚合酶;（1）.大肠杆菌的DNA聚合酶I;DNA聚合酶I的特点;DNA聚合酶I的功能;DNA聚合酶I的特点;（2）.大肠杆菌的DNA聚合酶Ⅱ;(3).大肠杆菌的DNA聚合酶Ⅲ;DNA聚合酶Ⅲ全酶;大肠杆菌的三种DNA聚合酶小节;（4）大肠杆菌DNA聚合酶Ⅳ和Ⅴ.;酶;ThereactioncatalyzedbyDNAligase;DNA连接酶;4.引物酶(primerase)（P419）;引物酶本质上是一种依赖DNA的RNA聚合（DDRP）该酶以DNA为模板，聚合一段RNA短链引物(primer)，以提供自由的3’-OH，使子代DNA链能够开始聚合。;引物酶(primerase);

DNA复制为什么要用引物？（为什么DNA聚合酶要用引物，RNA聚合酶不需要引物？为什么引???为RNA?）

⑴从模板复制最初几个核酸时，碱基堆集力和氢键都较弱，易发生错配

⑵新复制的最初几个核苷酸，没有与模板形成稳定双链，DNA聚合酶的3，→5，校对功能难发挥作用。;5.DNA复制的拓扑异构性质;DNA复制的拓扑异构性质;TypeItopoisomerases;TypeItopoisomerases;ModelforTopoIIMechanism;Topoisomerasesasdrugtargets:;6.DNA解螺旋酶（解旋酶）;7.单链DNA结合蛋白;四、原核生物DNA复制的过程;E.coli复制起始点—oriC的序列特征;原核生物DNA复制起始的相关蛋白质;DNA复制的起始;DNA复制的起始;引物;前导链合成一个引物,滞后链则结合多个引物酶,合成许多冈崎片段的引物。在同一复制叉上，引物的合成前导链早于滞后链。;研究发现大肠杆菌DNA复制唯一一个受到调节的阶段为起始阶段，DNA的甲基化与细菌质膜的的作用可以影响复制起始的时间，DNA复制的发动与DNA甲基化和细菌质膜有关。

大肠杆菌复制起点叫oriC，由245bp构成，在oriC中有11个含4bp的回文序列“GATC”，Dam甲基化酶可使该序列中的腺嘌呤第6位N甲基化。;DNA的复制调控发生在起始阶段;2.复制的延伸;DNA复制的延伸-随后链;DNA复制的延伸-随后链;后随链的模板在全酶上绕转180.形成一个小环;引发体(primosome)与引物合成;DNA