转录和转录组学.ppt

************4.2.3.转录起始的调控反式作用因子的活性调节表达式调节合成后即有活性，不能积累共价修饰磷酸化、去磷酸化，糖基化配体结合激素受体蛋白质与蛋白质相互作用复合物的解离与形成第159页,共188页，星期六，2024年，5月反式作用因子与顺式元件的结合反式作用因子的作用方式成环扭曲滑动Oozing反式作用因子的组合式调控作用组合式基因调控（conbinatorialgeneregulation）几种反式作用因子组合而发挥特定作用第160页,共188页，星期六，2024年，5月4.2.4.转录后水平的调控加帽和加尾的调控意义选择剪接的调控作用选择剪接（alternativesplicing）：exon，intron是否出现在成熟mRNA是可以选择的Exon选择，intron选择，互斥exon，内部剪接位点mRNA运输的控制第161页,共188页，星期六，2024年，5月第162页,共188页，星期六，2024年，5月第163页,共188页，星期六，2024年，5月第164页,共188页，星期六，2024年，5月4.2.5.翻译水平的调控翻译起始的调控阻遏蛋白的调控作用翻译起始因子的功能调控AUG对翻译的调控mRNA5′非编码区长度对翻译的影响mRNA稳定性调节小分子RNA对翻译水平的影响第165页,共188页，星期六，2024年，5月4.2.6.翻译后水平的调控新生肽链的水解肽链中氨基酸残基的修饰通过信号肽分拣、运输、定位第166页,共188页，星期六，2024年，5月4.2.7.组织特异性表达和时相性Spatialrestrictionofgeneexpression(c.p:housekeepinggenes)Multipleorgan/tissuepattern(e.g.SHHinnervoussystem)Specifictissur,celllineageorcelltype(e.g.beta-globingeneinerythroidcells)Individualcells(e.g.BCR,TCR)Intracellulardistribution第167页,共188页，星期六，2024年，5月TemporalrestrictionofgeneexpressionCellcyclestage(Developmentalstage(e.g.globingene)Differentiationstage(Collagengenes)Inducibleexpression第168页,共188页，星期六，2024年，5月五、RNA分析第169页,共188页，星期六，2024年，5月1.Northern印迹第170页,共188页，星期六，2024年，5月+核酸杂交：不同来源的两条核酸单链由于具有互补序列，在一起复性时，互补序列配对，形成杂化分子。第171页,共188页，星期六，2024年，5月2.狭缝印迹法3.组织原位杂交第172页,共188页，星期六，2024年，5月4.RNase保护测定法第173页,共188页，星期六，2024年，5月5.mRNA引物延伸分析第174页,共188页，星期六，2024年，5月6.应用单链DNA探针的S1定位法第175页,共188页，星期六，2024年，5月第176页,共188页，星期六，2024年，5月7.设置内参的RT-PCR内参基因:beta-actin,GAPDH,rRNARNA制备、逆转录、PCR、凝胶电泳、定量测定。第177页,共188页，星期六，2024年，5月8.实时定量PCR第178页,共188页，星期六，2024年，5月六、转录组学(transcriptomics)

GlobalmRNAprofiling

不同组织或细胞中基因转录的总体特征。不同组织或细胞在不同时间基因的转录有数量和表达程度的差异。基因表达模式提供单一基因辅助信息和其它基因的联系;确定基因和产物的功能途径和网络,有利于新药的发展。技术具备第179页,共188页，星期六，2024年，5月1.cDNA微阵列第180页,共188页，星期六，2024年，5月2.差异显示PCR(DDRT-PCR)3’端引物为T(11)MN5’端引物为10个碱基组成的随机引物分离总RNA后，行RT-PCR电泳、比较差异第181页,共1