高效液相色谱的维护和保养专家讲座.pptxVIP

高效液相色谱维护与保养液相色谱仪器使用及保养高效液相色谱的维护和保养专家讲座第1页

色谱泵保养流动相要过滤惯用缓冲液时，停泵前要用水冲洗，并用水冲洗柱塞杆清洗孔拧紧排液阀时，不要太用力，以不渗液为准更换流动相时，要确保两种溶剂互溶性,如不互溶，要用一个中间溶剂过渡.比如:使用无机盐缓冲液时,用前和用后均须用水过渡高效液相色谱的维护和保养专家讲座第2页

流动相脱气流动相脱气目标使色谱泵输液准确输液均匀准确，而且脉动减小保留时间及色谱峰面积重现性提升提升检测性能预防气泡引发尖峰基线稳定，信噪比增加溶剂紫外吸收本底降低保护色谱柱降低死体积预防填料氧化高效液相色谱的维护和保养专家讲座第3页

流动相脱气方法加热简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但轻易造成流动相组成改变抽真空同上，普通在溶剂抽滤同时，也有脱气效果超声波简单，但效果不理想。通惰性气体（普通用氦气）可保持连续脱气，多用于低压梯度在线脱气机可保持连续脱气，多用于低压梯度高效液相色谱的维护和保养专家讲座第4页

色谱泵排气操作使用前，应先确认泵头内没有气体，如有气体要按以下步骤排气：将排液阀反时针转2-3圈，用10ml注射器抽，直到出液按以下方法之一将泵后面放空将U6KC阀打开，或717设在PURGE状态或，将参比阀打开或，把色谱柱摘下打开电源开关开大流速到6~9ml/min同时用10ml注射器从排液阀注入流动相直到泵后流速稳定无气泡为止高效液相色谱的维护和保养专家讲座第5页

色谱泵运行注意用外部控制器与用泵面板控制区分有些型号外部控制器与面板不能同时用如需要面板控制，需要断开控制线或关闭控制器排气后色谱泵即可运行注意∶排气后，先设流速为0恢复排气时断开部分，如∶进样器、色谱柱如需要，恢复排气时断开控制线依据色谱柱不一样，逐步提升流速到设定值高效液相色谱的维护和保养专家讲座第6页

液相色谱对流动相要求除色谱柱对流动相要求外，还有∶与检测器匹配脱气防止卤素离子（不锈钢系统）溶剂粘度预防细菌生长高效液相色谱的维护和保养专家讲座第7页

流动相保留有机溶剂流动相:室温下密封,避光保留缓冲盐流动相:当日现配现用低温下密封保留,普通不超出3天预防长菌有机溶剂与水（缓冲盐）混配流动相:低温密封保留预防有机相挥发选取适宜容器高效液相色谱的维护和保养专家讲座第8页

2星期1天1星期1小时新鲜配制5101520250分保留于聚乙烯瓶中超纯水测试条件水样:40mltraceenrichment@2.0ml/min色谱柱:C18反相柱(Waters)梯度:线性100%水－100%乙腈波长:254nm高效液相色谱的维护和保养专家讲座第9页

1天1星期新鲜配制5101520250分保留于标准棕色玻璃瓶中超纯水测试条件水样:40mltraceenrichment@2.0ml/min色谱柱:C18反相柱(Waters)梯度:线性100%水－100%乙腈波长:254nm高效液相色谱的维护和保养专家讲座第10页

检测器保养 如长时间不用检测器能够关掉紫外灯在4小时以上不用时，太频繁开关也不好不要让缓冲液长久停滞在检测池内用纯水冲洗示差检测器及荧光检测器注意流动池耐压，不要在后面加压高效液相色谱的维护和保养专家讲座第11页

关于自动进样器针清洗PurgeInjector与NeedleWash洗针溶剂瓶(绿色塑料管)不要放在717plus上部，应放于717plus同一水平面洗针溶剂依据流动相不一样应有不一样：异丙醇？高效液相色谱的维护和保养专家讲座第12页

液相色谱系统清洗与钝化普通采取30％磷酸作为清洗剂，用6M硝酸作为钝化剂，先清洗再钝化清洗目标是去除不锈钢管路及系统内污垢钝化目标是使不锈钢管路内表面形成光滑均匀氧化膜高效液相色谱的维护和保养专家讲座第13页

高效液相色谱维护与保养色谱柱使用及保养高效液相色谱的维护和保养专家讲座第14页

测柱效–良好色谱试验习惯拿到一根新色谱柱时，先测柱效保留在新色谱柱上测得色谱图，并统计色谱测试条件定时检测柱效定时检测仪器谱带展宽高效液相色谱的维护和保养专家讲座第15页

测柱效方法色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同Waters色谱柱均附有UseandCare说明书,可按说明书所述方法测定以下是Waters反相C18柱测定方法:流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min样品:50mgAcenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600μl丙酮进样量5μl检测波长:254nm高效液相色谱的维护和保养专家讲座第16页

计算色谱柱柱效N理论塔板数计算公式：W s 方法Wtan 16 切线法Wh 5.54 半峰高W3s 9 3sW4s 16