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食品中天冬酰胺和谷氨酰胺的测定
1范围
本标准规定了食品中天冬酰胺和谷氨酰胺测定的柱前衍生-高效液相色谱法和液相色谱-
串联质谱法。
第一法中直接提取法适用于特殊膳食用食品中游离态天冬酰胺和游离态谷氨酰胺的测
定；第一法中酶解提取法适用于特殊膳食用食品中天冬酰胺总量和谷氨酰胺总量的测定。
第二法适用于特殊膳食用食品中天冬酰胺总量和谷氨酰胺总量的测定。
第一法柱前衍生-高效液相色谱法
2原理
试样经直接提取或灰色链霉菌蛋白酶酶解，天冬酰胺和谷氨酰胺与丹磺酰氯进行衍生反
应，衍生物经C18柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，外标法定量。
3试剂和材料
除另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。
3.1试剂
3.1.1甲醇（CHO）：色谱纯。
4
3.1.2乙腈（CHN）：色谱纯。
23
3.1.3丹磺酰氯（CHClNOS）。
12122
3.1.4无水碳酸钠（NaCO）。
23
3.1.5无水磷酸氢二钠（NaHPO）。
24
3.1.6盐酸甲胺（CHN·HCl）。
5
3.1.7三羟甲基氨基甲烷（Tris碱，CHON）。
4113
3.1.8灰色链霉菌蛋白酶（XIV型；来源于灰色链霉菌）：酶活力≥3.5U/mg。
3.1.9浓盐酸（HCl）。
3.1.10磷酸（HPO）：色谱纯，含量≥85%。
34
3.2试剂配制
3.2.1丹磺酰氯溶液（2.0g/L）：称取0.2g丹磺酰氯，用乙腈溶解并定容至100mL，现配
现用。
3.2.2盐酸溶液（1.0mol/L）：吸取8.3mL浓盐酸，加水稀释至100mL。
3.2.3Tris缓冲液（0.05mol/L）：称取6.06g三羟甲基氨基甲烷于1000mL烧杯中，加水
800mL溶解，用1.0mol/L盐酸溶液调节溶液pH至8.0±0.1，用水稀释至1000mL。4℃保
1
存，有效期1个月。
3.2.4蛋白酶溶液（52.5U/mL）：称取0.15g灰色链霉菌蛋白酶，用Tris缓冲液溶解并定容
至10mL，使蛋白酶浓度为52.5U/mL。现配现用。
3.2.5碳酸钠缓冲溶液（60mmol/L）：称取0.318g无水碳酸钠，加40mL水溶解，用l.0
mol/L盐酸溶液调pH至9.5±0.1，用水定容至50mL。现配现用。
3.2.6盐酸甲胺溶液（20g/L）：称取2.0g盐酸甲胺，用水溶解并定容至100mL。4℃保
存，有效期3个月。
3.2.7磷酸氢二钠溶液（10mmol/L）：称取无水磷酸氢二钠1.42g，用800mL水溶解，用
磷酸调节pH至6.5±0.1，用水稀释至1000mL。
3.2.820%甲醇溶液：量取20mL甲醇，加水稀释至100mL。
3.3标准品
3.3.1天冬酰胺标准品（CHNO，CAS号：70-47-3）：纯度≥99%，或经国家认证并授予
4823
标准物质证书的标准物质。
3.3.2谷氨酰胺标准品（CHNO，CAS号：56-85-9）：纯度≥99%，或经国家认证并授予
51023
标准物质证书的标准物质。
3.4标准溶液配制
3.4.1天冬酰胺标准储备液（2.00mg/mL）：准确称取100mg
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