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第三章

酶化学

(ChemistryofEnzyme);本章重点及难点

重点：理解酶作为生物催化剂特点、国际命名；理解酶催化作用机理；掌握酶促反应动力学中米氏方程及Km意义、应用，掌握影响酶促反应动力学原因及与影响酶催化高效性原因之间区别。掌握别构酶特点及核酶、同工酶、诱导酶等概念。

难点：酶催化作用机理、各原因对酶促反应速度影响及酶促反应动力学应用。;第一节通论;一、酶学研究历史;;酶专一性类型;四、酶作用专一性假说;

;五、酶命名和分类;第二节

酶分子结构与功效

;酶;*各部分成份在催化反应中作用;辅助因子分类

（按其与酶蛋白结合紧密程度）;或称活性部位，酶分子中直接和底物结合并起催化反应空间局限（部位）。;

催化部位

酶分子中促使底物发生化学改变部位称为催化部位，催化部位决定酶所催化反应性质。

;活性中心特点;Asp;2.必需基团;;三、与酶高效率相关主要原因（策略）;酶分子中可作为亲核基团和酸碱催化功效基团;胰凝乳蛋白酶反应详细机制（1）;胰凝乳蛋白酶反应详细机制（2）;第三节

酶促反应动力学

;本节需要处理问题;一、底物浓度对反应速度影响

（一）、曲线基本含义;;;当底物浓度高达一定程度;（二）米氏方程式;;;;米氏方程推导;当反应速度为最大反应速度二分之一时;Km意义;Vmax意义

定义：Vmax是酶完全被底物饱和时反应速度，

与酶浓度成正比。;Lineweaver–Burk作图法—双倒数作图法。;二、酶浓度对酶促反应速度影响;三、温度对酶促反应速度影响

;四、pH对酶促反应速度影响;五、激活剂对酶作用影响;六、克制剂对酶反应影响

酶克制作用

有些物质能与酶分子上一些必须基团结合（作用),使酶活性中心化学性质发生改变，造成酶活力下降或丧失。

失活作用

凡可使酶变性而引起酶活力丧失作用。

克制剂

能够引起酶克制作用化合物。

克制剂特点

a.在化学结构上与被克制底物分子或底物过渡状态相同。

b.能够与酶活性中心以非共价或共价方式形成比较稳定复合体或结合物。

;两者区别：;克制作用类型

;

(1)不可逆克制作用

克制剂与酶反应中心活性基团以共价形式结合，引起酶永久性失活。;非专一性不可逆克制剂

;专一性不可逆克制剂

;（2）可逆性克制作用;竞争性可逆克制

;;;磺胺类药物抑菌机制

与对氨基苯甲酸竞争二氢叶酸合成酶;非竞争性可逆克制;;非竞争性克制曲线;①定义：克制剂不与酶结合，只与ES复合物结合，引、

起酶活性下降。

②动力学：km减少，酶对底物亲和力增长，最大反应

速度减少，也无法通过改变底物浓度而改

变反应克制剂影响。

举例：多底物反应中

;;反竞争性克制曲线

;（一）、酶分离纯化普通原则－与蛋白质相同

1、材料预处理；

2、破碎细胞；

3、蛋白质粗提（与杂质分开）；

4、将蛋白质沉淀出来（等电点、盐析法、有机溶剂法）；

5、粗制品纯化（凝胶过滤法、纤维素柱色谱法、亲和层系法）。

;1.酶活力（enzymeactivity,也称酶活性）;习惯上沿用单位如:;2.酶活力单位表示办法;3．测定酶活力时应注意几点;4.酶活力测定办法;习惯上沿用单位如:;（2）荧光法（fluorometry）;（3）酶偶联分析法(enzymecouplingassay);例：测己糖激酶活性;5.酶比活力（specificactivity，也称比活性）;终点法（终止法）：测定完毕一定量反应所需要时间，普通

测产物生成量比较好。

动力学办法（连续法）：测定一定期间内所起化学改变量，

灵敏度较高。

;1.纯化倍数

2.比活力

3.回收率;

;一、酶原与酶原激活

;酶原激活机理;赖;酶原激活生理意义;二、变构酶;酶别构（变构）效应示意图;;;

同促效应：配体相同。当一个效应物与酶结合后，

影响另一相同效应物与酶结合。

异促效应：配体不同。当一个效应物与酶结合后，

影响另一不同效应物与酶另一部分结合。

;2、协同效应;别构酶调整两种模型

;齐变模型（MWC）：1965年由Mon