U3000高效液相色谱仪操作规程.docx

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武陵山中药材检验检测中心

质量文件

文件编号 wlsgc028

U3000高效液相色谱仪操作规程

批准人批准日期

一、操作前预备：

生效日期版本号

预备好所需的流淌相，有机相为HPLC级别，水和缓冲盐溶液需要颖配置并过0.45um微孔滤膜，流淌相在使用前用超声清洗器超声10-15min，以除去大局部气泡。样品溶液用0.45um过滤头过滤备用。柱塞清洗液为含有10%异丙醇的水溶液，清洗液应与流淌相混溶，并不含任何缓冲液，一般用50%甲醇或乙腈溶液。二、开机：

依次翻开泵、自动进样器、柱温箱、检测器的电源；翻开电脑显示器电源，翻开电脑主机电源〔POWER〕，启动电脑；并依据检测的需要连接检测器的管路。

双击屏幕右下角“效劳治理器”快捷图标，消灭对话界面后点击“启动仪器掌握器”启动，等显示“本地仪器掌握器运行空闲”，可以关闭界面。

双击桌面上的Chromeleon7图标。

旋开泵上的排液阀〔2-3圈〕；设置A通道为100%，点击“冲洗”，然后再消灭的对话框中点击“无视并执行”〔默认冲洗5分钟〕；然后分别“冲洗”流路中其他通道气泡；排完气泡后关闭排液阀。

设置流淌相的比例及流速后，点击“马达”。此时泵自动会以设置的流速进展运行。

在掌握面板“柱温箱”掌握框中，设置预备分析样品所使用的柱温箱温度。

清洗进样器：依次执行灌注注射器，清洗缓冲环，外部清洗针。三、样品分析：

建立仪器方法：点击菜单栏“创立”＞“仪器方法”，进入仪器方法向导对话框，分别设定运行时间、使用的检测器、流淌相梯度等参数，输入仪器方法名称，选择保存路径。

建立处理方法：点击菜单栏“创立”＞“处理方法”依据需要选择处理方法模板，输入处理方法名称，选择保存路径。

报告模板：点击菜单栏“创立”＞“报告模板”进入建报告模板对话框，选择“默认”，输入模板名称，选择保存路径。

建立序列：点击菜单栏“创立”＞“序列”，翻开建序列向导对话框，输入进样名称格式、样品数、进样次数、起始位置等参数，并选择仪器方法、处理方法、报告模板，输入序列名称，保存序列，在生成的序列表中，依据需要对进样量、方法文件、样品瓶位置进展更改，点击保存。

翻开氘灯〔待系统压力稳定后约15min后再开灯〕：在掌握面板“Detector”掌握框中，选中“紫外灯”选框，及“可见灯”选框〔假设波长在可见范围〕。

在掌握面板“UV”掌握框中，设置波长，采集频率〔10HZ〕，时间常数〔0.5s〕；点击“监视基线”，选中通道1并确定。

待基线稳定后，点击“监视基线”，点击确定，关闭查看基线。

点击左下方“数据”，并选中要分析的序列，然后点击“开头”启动样品表进展分析〔假设序列里有完成的样品，则会变成连续，点连续；假设该序列还在队列中则会显示删除，点击删除后在点击连续〕；

样品全部检测完毕后，假设不再分析样品应马上关掉氘灯，延长氘灯使用的

寿命。

四、数据处理五、关机：

冲洗色谱柱〔假设使用了缓冲盐，首先使用10%甲醇水溶液冲洗色谱柱30分钟，然后使用纯甲醇冲洗色谱柱30分钟〕。

关闭泵马达，断开连接，关闭工作站。

关闭检测器、柱温箱、自动进样器、泵的电源。

关闭计算机，并填写仪器设备使用记录。六、留意事项：

溶剂泵的留意事项：

使用时要留心防止溶剂瓶内的流淌相被用完，否则空泵运转会磨损柱塞、缸体和密封环，最终产生漏液。

防止任何固体微粒进入泵体，由于尘埃或其他任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流淌相中的任何固体颗粒。流淌相过滤，可承受滤膜〔0.22um或0.45um〕等滤过。

输液泵的工作压力不能超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。

流淌相应领先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，假设有大量的气泡，泵就无法正常工作。

溶剂泵长期不用时，用甲醇以1.0ml/min冲洗各个通道。

泵的清洗液要勤换。

每次开启泵之前要排解管道中是气泡。

流淌相由无机盐溶液转换有机溶剂前要用90%去离子水清洗管路。

转换不同流淌相时留意两者是否简洁混合或者发生反响。

长期不用或运输前要到空清洗液瓶。

色谱柱的使用留意事项：

避开压力和温度的急剧变化及任何机械震惊。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然上升或降低也会冲动柱内填料，因此在调整流速时应当缓慢进展，进样阀的转动不能过缓。

一般说来色谱柱不能反冲，只有生产厂家指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会快速降低柱效。

选择使用适宜的流淌相〔尤其是pH〕，以避开固定相被破坏。有时可以在进样器前连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流淌相在进入分析之前被硅胶“饱和”，避开分析柱中的硅胶