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转录因子AP2a在RNA聚合酶Ⅲ指导基因转录中的作用

AP2a(AP2α)是哺乳动物细胞内一种重要的转录因子,它能参与生物体细胞内多种生理

生化活动。本课题前期的研究表明,FLNA能够抑制RNA聚合酶Ⅲ所指导的基因转录及其

转录因子BRF1和TFⅢC2的表达;通过mRNA-seq分析发现,在SaOS2FLNA敲低细胞中

也明显增加AP2amRNA的表达。通过检测AP2a的mRNA和蛋白水平,我们发现FLNA

敲低的两组系(HeLa和SaOS2)确实能增加AP2a的表达。由于FLNA能同时抑制

AP2a,BRF1,TFⅢC2及RNA聚合酶Ⅲ(PolⅢ)基因的表达,AP2a是否也介导RNA聚合酶

Ⅲ及其转录因子TFⅢC2和BRF1的基因转录并不清楚。因此,本研究以AP2a作为研究对

象,探究其在PolⅢ指导的基因转录中的作用及其机制。为了完成以上研究目标,我们建立

了293T和Hela细胞AP2ashRNA稳定表达细胞系并利用这些细胞系研究AP2a对PolⅢ

及其转录因子BRF1和TFⅢC2表达的影响。结果表明,AP2a敲低能够显著降低PolⅢ、

BRF1和TFⅢC2基因表达水平,提示AP2a是PolⅢ指导的基因转录所必需的。为了进一

步确定这一发现,我们将293T细胞过表达AP2a;结果表明,AP2a过表达显著增加PolⅢ、

BRF1和TFⅢC2基因表达水平。这些结果证明AP2a是维持PolⅢ正常基因转录所必需

的。由于FLNA敲低增强PolⅢ基因表达,在FLNA沉默细胞系中再次敲低AP2a是否下调

PolⅢ基因表达还不清楚。利用RT-qPCR和Westerblot分析FLNA-AP2a双敲低细胞

系,数据表明,FLNA-AP2a双敲低下调PolⅢ基因和BRF1、TFⅢC2的表达水平。为了明白

转录因子AP2a是如何调RNA聚合酶Ⅲ及其转录因子BRF1和TFⅢC2的表达,因此我们

对RNA聚合酶Ⅲ的转录因子BRF1和TFⅢC2的启动子进行结合位点的分析,发现在其启

动子区均存在AP2a的结合位点。因此,我们推测,AP2a可能与PolⅢ相关转录因子BRF1

和TFⅢC2的结合调PolⅢ基因的表达。为了验证这一猜测,我们选择将BRF1和TFⅢ

C2启动子克隆在报告基因载体上并转染细胞。数据表明,当细胞的AP2a表达降低时,报告

基因表达水平也降低;当过表达AP2a时,报告基因表达水平则升高。这些结果提示,AP2a调

PolⅢ基因的表达是通过影响BRF1、TFⅢC2基因转录来实现的。这些发现不仅加深了

对细胞中AP2a功能的了解,也为进一步探索AP2a对细胞增殖的调机制奠定了基础。