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实验四、叶绿素的提取、分离及化学性质鉴定

一．实验目的：

掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。

二．实验原理：

1、溶解性。

叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取2、吸附性。滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？)，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。

当用适当溶剂推动时，混合物中各成分在两相（固定相和流动相）间具有不同分配系数，所以移动速度不同，一定时间后可将各种色素分离

三．实验材料:

新鲜植物叶片

器具：

研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张

试剂：95%乙醇，石油醚

四．实验步骤 :

色素提取（乙醇粗提液）

取新鲜叶片洗净擦干，去中脉 称1g左右 剪碎于研钵

研钵中加3-5ml95%乙醇研磨成匀浆 过滤于刻度试管 残渣用少许乙醇冲洗一并过滤 定容至10ml

注：研磨用石英砂或SiO2以利于充分研磨，加入CaCO3以保护叶绿素。

荧光观察

将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光

色素萃取（石油醚提取液）

取乙醇提取液5ml与另一支试管 加2ml石油醚摇荡 静止片刻上层深绿色为石油醚提取液

注：用丙酮提取会更好些，各色素在石油醚中溶解度不同

色素分离

将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔 取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平） 用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端待风干后再滴加几次。

将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央 将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚 迅速盖好培养皿。

推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和 名 称

注：带宽和移动速度说明？

答： 带 宽：色素越多，色素带越宽,所以色素共分为好几个带移动速度：溶解度高的移动速度快，就越接近滤纸上边缘。