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小鼠趋化因子CXCL10真核表达载体的构建

【摘要】应用RT-PCR方法，从小鼠脾脏T细胞的mRNA中，

扩增获得编码小鼠趋化因子CXCL10的cDNA，并加上人单核细胞趋

化蛋白1的信号肽基因，将其克隆到Pucm-T载体，经酶切及测序鉴

定，进而构建CXCL10重组真核表达载体。采用脂质体法体外转染

COS-7真核细胞，经Westernblot和趋化指数检测，转染细胞能够表达

CXCL10蛋白，其上清对淋巴细胞具有趋化作用。CXCL10的真核表

达载体构建成功，为进一步研究其在肿瘤治疗中的作用奠定了基础。

【关键词】CXCL10；基因克隆；真核表达载体

Genecloningandeukaryoticexpressionvectorconstructionof

murineCXCL10

【Abstract】ThecDNAfragmentencodingthemurineCXCL10was

obtainedfrommRNAofmouseTcellsbyusingreversal

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transcript-polymerasechainreaction(RT-PCR)andcontainedasignal

peptidederivedfromthehumanmonocytechemoattractantprotein1,then

itwasclonedintothePucm-Tvector.Bypartialnucleotidesequencing,the

cDNAwasconsistentwiththereportedmCXCL10cDNAinthegenebank,

andthenwasinsertedintotheeukaryoticexpressionvectorpcDNA3.1(+).

TherecombinantplasmidwastransfectedintoCOS-7celllinebyDOTAP

liposome.TheexpressionofthetargetmoleculewasassayedbyWestern

blotandchemotaxisassay.Itwasfoundthatthecellstransfectedwith

plasmidvectorcouldexpressmCXCL10proteinandit

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’sculturesupernatantscouldattractTcellsmarkedly.Thesuccessful

constructionofmCXCL10eukaryoticexpressionvectorlaysthefoundation

forit’sfurtherresearchingintreatmentoftumor.

【Keywords】CXCL10;genecloning;eukaryoticexpressionvector

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趋化因子CXCL10(IFN-γinducibleprotein-10,IP-10)，属于CXC