免疫自动化仪器分析及应用.ppt

㈡碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析仪Access全自动酶标记化学发光免疫分析仪UniCel?DxI800IMMULITE2000型全自动酶标记化学发光免疫分析系统（三）碱性磷酸酶标记的微粒子荧光免疫分析仪AXSYM全自动酶标记荧光免疫分析仪日本东曹的AIA-1800型全自动酶标记荧光免疫分析仪?三、电化学发光免疫分析仪电化学发光免疫测定工作示意图ELECSYS2010型全自动电化学发光免疫分析仪ModularAnalyticsE模块170型可用于内分泌激素类、肿瘤标志物类、心肌标志物类、病毒标志物类、治疗性药物浓度、骨代谢指标和贫血类等方面的检测，是目前免疫化学应用最为广泛的新技术。?四、在临床免疫检测中的应用第三节自动化荧光免疫分析系统荧光免疫自动化分析主要是将抗原—抗体结合反应与荧光物质发光分析和计算机技术有机结合的一项自动化免疫分析技术。根据抗原抗体反应后是否需要进行固相分离，分为均相和非均相两类。非均相荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定法；均相荧光免疫测定主要有荧光偏振免疫测定法。免疫检验自动化（automationofimmunoassays)是将免疫学反应检测过程中的取样、加试剂、混合、温育、固相载体分离、信号检测、数据处理、打印报告和检测后的仪器清洗等步骤由计算机控制，自动化进行。自动化分析技术自动化免疫比浊分析技术荧光免疫自动分析技术化学发光自动免疫分析酶联免疫分析技术第一节自动化免疫浊度分析系统一、免疫透射比浊法1959年Schultze1967年Ritchie1977年sternberg1.将待检标本和抗原参考品作适当稀释。（二）仪器工作过程2.将待测标本和标准抗原溶液（5个浓度抗原标准品）与适当过量的抗血清混合，在一定条件下，抗原抗体反应完成后，在340nm处测定各管吸光度。3.按log-logit转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲线拟合，制备剂量-反应曲线，由计算机处理，计算出抗原浓度。（三）方法评价优点:灵敏度较单扩高，重复性好，操作简便，结果准确不足:①抗体用量较大；②溶液中存在的抗原－抗体复合物分子应足够大③透射比浊测定在抗原－抗体反应的第二阶段，检测需在抗原抗体反应达到平衡后进行，耗时较长。用抗体致敏的大小适中、均匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2μm），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚，使透射光和散射光即出现显著变化。如图所示：a为单个胶乳颗粒不阻碍光线透过，b为抗原抗体结合形成的凝聚胶乳大颗粒使透射光减弱或散射光增强。二、免疫胶乳比浊法（一）原理：（二）方法评价本法敏感度大大高于普通比浊法，可达ng/L水平，操作简便，易自动化；血清中的RF可与IgGFc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab′)2片段代替IgG既可消除此干扰，又可克服IgG致敏胶乳的自凝现象；免疫胶乳轻度自凝或抗体活性降低会严重影响结果。三、免疫散射比浊法(一)原理Iθ＝I0［4π2（dn/dc)2Mc(1+cosθ)］Nγ2λ4Iθ：与入射光成θ角处散射光强度；λ：入射光的波长；I0：入射光的强度；dn/dc：校正因子，反映了溶液折射指数和颗粒浓度的变化；M：颗粒分子量；c：浓度；N：阿佛加德指数；γ：颗粒到检测器的距离；Θ：散射光与入射光的夹角（散射夹角）。45°Debye散射定时散射比浊法是在保证抗体过量的情况下，加入待测抗原，此时反应立即开始，在反应的第一阶段，溶液中产生的散射光信号波动较大，所获取的信号计算出的结果会产生一定的误差。定时散射比浊法是避开抗原抗体反应的不稳定阶段，即散射光信号在开始反应7.5s～2min内的第一次读数，专门在抗原抗体反应的最佳时段进行读数，将检测误差降到最低。(二)定时散射比浊法（fixedtimenephelometry）定时散射比浊法测定原理示意图5ul样本7.5秒(1)抗体适当过量(2)对抗原过量进行阈值限定45ul样本(1)抗原抗体预反应阶段(2)反应阶段(3)信号检测2分钟6分钟（2+4分钟）预反应阶段反应阶段BNProSpec全自动特定蛋白分析仪速率散射比浊法是抗原抗体结合反应的动力学测定法。所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫