免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用.ppt

2.淋巴细胞转化的刺激物非特异性刺激物：PHA------T细胞ConA-------T细胞PWM-------T、B细胞特异性刺激物：破伤风类毒素纯化蛋白衍生物（PPD)白色念珠菌等

3.检测方法形态学检查法3H-TdR掺入法MTT比色法（1）形态学检查法刺激物淋巴细胞（72h）母细胞化未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化的淋巴细胞未转化的淋巴细胞淋巴母细胞过渡型细胞大小(直径μm)12～2012～166～8核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰、1～4个有或无无有丝分裂有或无无无胞质、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少、天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无方法学评价：优点：形态学方法简便易行，普通光学显微镜便能观察结果，适于基层实验室应用。缺点：是依靠肉眼观察形态学变化，判断结果易受主观因素影响，重复性和准确性较差。（2）3H-TdR掺入法优点：3H-TdR掺入法敏感性高，客观性强，重复性好。缺点：但需一定设备条件，同时还存在放射性核素污染问题。PHA淋巴细胞（54h）DNA合成期+3HTdR掺入收集细胞?检测β射线测定细胞内的3H－TdR刺激物淋巴细胞MTT甲赞（蓝黑色颗粒）二甲基亚砜溶解（3）MTT比色法A570比色，颜色深浅反映细胞增殖水平(二)T细胞分泌功能测定体外培养的T细胞经各种丝裂原或抗原刺激后,分泌各种细胞因子,可借助免疫学、细胞生物学及分子生物学技术分别检测细胞因子含量、生物学活性或基因表达水平，以反映T细胞功能。

（三）T细胞介导的细胞毒试验1.原理：靶细胞抗原CTL细胞靶细胞被破坏和溶解致敏CTL靶细胞形态学方法：CTL细胞+肿瘤细胞计数残留肿瘤细胞51Cr释放法：淋巴细胞（CTL）+51Cr标记的肿瘤细胞51Cr释放测定γ射线2.方法意义：肿瘤患者CTL杀伤肿瘤细胞的能力T细胞细胞毒性试验示意图(四)体内试验常用于诊断某些病原微生物感染和细胞免疫缺陷等疾病特异性抗原皮肤试验：OT试验PHA皮肤试验：非特异性激活淋巴细胞二、B细胞功能检测B细胞增殖能力的试验溶血空斑试验B细胞抗体形成功能的检测体内试验经典的溶血空斑试验：检测动物抗体形成细胞功能被动溶血空斑试验：指抗体形成细胞产生的Ig与SRBC上的抗原结合，在补体参与下发生溶血脾补体BAg补体(一)溶血空斑试验B免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用内容提要第一节???免疫细胞的分离第二节淋巴细胞表面标志及亚群分类第三节抗原提呈细胞表面标志的检测第四节淋巴细胞的功能检测第五节其他免疫细胞功能检测技术第六节免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用免疫细胞:即参与免疫应答的细胞免疫活性细胞：淋巴细胞免疫细胞辅佐作用细胞：单核-巨噬细胞等参与细胞：N、E、B等第一节免疫细胞的分离外周血单个核细胞分离淋巴细胞的分离T、B细胞和T细胞亚群的分离自然沉降细胞的特性：密度梯度离心技术细胞表面标志：流式细胞仪免疫磁性微珠分离法细胞分离基本原理一、外周血单个核细胞分离外周血单个核细胞（peripheralmononuclearcells,PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。F