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盲肠结扎穿孔术诱发的脓毒症对肠道干细胞增殖和

分化的影响

【摘要】目的分析盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症对肠上皮细胞增殖和

分化的影响。方法①动物实验：将16只雄性C57BL/6小鼠接随机数字表法分

为假手术组(Sham组)和CLP致脓毒症模型组(CLP组)，每组8只。术后5

d取空肠组织，用聚合酶链反应(PCR)检测富亮氨酸复序列G蛋白耦联受体5

(LGR5)和肠型碱性磷酸酶(IAP)的转录表达水平；用蛋白质免疫印迹试验(W

esternblotting)检测LGR5的翻译水平；用免疫组化法分析增殖细胞核抗原

(Ki67)的表达；用改良钙钻染色法和比色法检测组织IAP水平；免疫荧光法检

测肠道潘氏细胞标记分子溶菌酶1(LZ1)和杯状细胞标记分子黏蛋白2(MUC2)

的表达。②细胞实验：取对数生长期的大鼠小肠隐窝细胞(IEC6细胞)，并

分为空白对照组和脂多糖(LPS)组(LPS5Ug/mL)。24h后分别用PCR

和Westernblotting检测LGR5的转录和翻译水平；用5-乙烷基-2-脱氧尿昔

(EdU)染色检测IEC6细胞增殖情况；分别用PCR和比色法检测IAP的转录和翻

译水平。结果①动物实验：免疫组化结果显示，CLP组小鼠空肠组织Ki67

染色阳性率低于Sham组〔(41.7+2.5)%比(48.7±1.4)%,P=0.01)。P

CR和Westernblotting结果显示，CLP组与Sham组小鼠空肠组织LGR5表达差

异均无统计学意义(Lgr5mRNA：0.7+0.1比1.0+0.2,P=0.11；LGR5/B-a

ctin：0.83+0.17比0.68±0.19,P=0.24)；CLP组小鼠空肠组织IAP在转录

水平(0.4±0.1比1.0+0.1,P0.01)和蛋白水平(U/g：47.3+6.0比73.1

±15.3,P0.01)均低于Sham组。免疫荧光显示，CLP组小鼠空肠组织LZ1、

MUC2的表达水平均低于Sham组。②细胞实验：PCR和Westernblotting结

果显示，LPS组与空白对照组IEC6细胞LGR5表达水平差异无统计学意义(Lgr5

mRNA：0.9+0.1比1.0±0.2,P=0.33；LGR5/0-actin：0.71+0.18比0.6

9+0.04,P=0.81)。LPS组IEC6细胞增殖率低于空白对照组，但差异无统计

学意义(EdU阳性率：(40.5±3.8)%比(46.5+3.6)%,P=0.11)。LPS组I

AP转录水平(0.5±0.1比1.0+0.2,P0.01)和蛋白水平(U/g：15.0+4.0

比41.2+10.4,P0.01)均低于空白对照组。结论CLP诱发的脓毒症可抑

制肠上皮细胞的增殖和分化，损伤肠上皮自我更新的能力。

【关键词】脓毒症；盲肠结扎穿孔术；肠上皮；增殖；分化

脓毒症是由感染诱发的危及生命的器官功能障碍，是症监护病房常见的危

症，病死率可超过30%［1］。我国每年新发脓毒症250万人，每年超过70万

人死亡［2］,且脓毒症患者出院后生活质量明显降低［3］。肠道既是脓毒症

要的靶器官，同时也是脓毒症进展的要驱动力［4］。正常肠道具有完善的屏

障功能，肠道内的细菌可被有效地隔离在肠道内［5］。脓毒症可导致肠上皮通

透性增加，破坏黏膜完整性，导致肠道内容物持续向循环中转移，进一步促进脓

毒症的进展［6-7］o肠道屏障功能的恢复对于延缓脓毒症的进展具有要意义。

肠道上皮细胞的增殖和分化是肠道修复的主要机制［8］，但目前脓毒症对肠道

上皮细胞增殖和分化的影响尚不清楚。本研究中通过体内实验和体外实验，旨在

探索脓毒症对肠道上皮细胞增殖和分化的影响。

1材料与方法

1.1实验动物及主要试剂：8周龄雄性C57BL/6小鼠购于北京华阜康生物

科技公司，动物许可证号：SCXK(京)2019-0008o碱性磷酸酶钙钻法染色试剂

盒（北京Solarbio公司）,碱性磷酸酶比色法测试盒（武汉Elabsience公司），

5-乙烷基-2-脱氧尿甘（5-ethynyl-2-