2023年版药典微生物限度检查法.docx

附录ⅪJ微生物限度检查法

微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查工程包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及把握菌检查。

微生物限度检查应在环境干净度10000级下的局部干净度100级的单向流空气区域内进展。检验全过程必需严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业干净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进展干净度验证。

供试品检查时，假设使用了外表活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。

除另有规定外，本检查法中细菌及把握菌培育温度为30℃～35℃；霉菌、酵母菌培育温度为23℃～28℃。检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10cm2为单位报告，特别品种可以最小包装单位报告。

检验量

检验量即一次试验所用的供试品量(g、ml或cm2)。

除另有规定外，一般供试品的检验量为10g或10ml；膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g或20ml(其中10g用于阳性比照试验)。

检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4片。一般应随机抽取不少于检验用量(两个以上最小包装单位)的3倍量供试品。

供试液的制备

依据供试品的理化特性与生物学特性，实行适宜的方法制备供试液。供试液制备假设需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃。供试液从制备至参与检验用培育基，不得超过1小时。

除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。1.液体供试品

取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1∶10的供试液。油剂可参与适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

固体、半固体或黏稠性供试品

取供试品10g，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1∶10的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。

需用特别供试液制备方法的供试品(1)非水溶性供试品

方法1取供试品5g(或5ml)，加至含溶化的(温度不超过45℃)5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，渐渐参与45℃的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1∶20的供试液。

方法2取供试品10g，加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯(制法见附录ⅩⅢB无菌检查法中供试品的无菌检查项下)和无菌玻璃珠的适宜容器中，必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后参与45℃的pH7.0无菌氯化钠

-蛋白胨缓冲液100ml，振摇5～10分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为1∶10的供试液。(2)膜剂供试品

取供试品100cm2，剪碎，加100ml的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(必要时可增加稀释液)，浸泡，振摇，作为1∶10的供试液。

(3)肠溶及结肠溶制剂供试品

取供试品10g，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液(用于肠溶制剂)或pH7.6无菌磷酸盐缓冲液(用于结肠溶制剂)至100ml，置

45℃水浴中，振摇，使溶解，作为1∶10的供试液。(4)气雾剂、喷雾剂供试品

取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1小时，取出，快速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液(假设含非水溶性成分，加适量的无菌聚山梨酯80)中，混匀，取相当于10g或10ml的供试品，再稀释成1∶10的供试液。

(5)贴剂供试品

取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料(如无菌纱布)掩盖贴剂的粘贴面以避开贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有外表活性剂(如聚山梨酯80或卵磷脂)的稀释剂

中，用力振荡至少30分钟，制成供试液。贴剂也可以其他适宜的方法制备成供试液。(6)具抑菌活性的供试品

当供试品有抑菌活性时，承受以下方法进展处理，以消退供试液的抑菌活性后，再依法检查。常用的方法如下。

①培育基稀释法取规定量的供试液，至较大量的培育基中，使单位体积内的供试品含量削减，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml，每1ml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培育基，混匀，凝固，培育，计数。每1ml供试液所注的平皿中生长的菌数之和即为1ml的菌落数，计算每1ml供试液的平均菌落数，按平皿法计数规章报告菌数；把握菌检查时，可加大增菌培育基的用量。

②离心沉淀法取确定量的供试液，500转/