2023年版药典菌种传代中国药典2023年版二部及菌种使用说明书.docx

2023版药典菌种传代中国药典2023年版二部及菌种使用

说明书

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依据:中国药典2023年版二部及菌种使用说明书1.标准菌的来源

标准菌株由中国药品生物制品检定所医学菌种保藏中心(ChinaMedicalculturecollection,CMCC)供给的冷冻枯燥菌种(0代)或由上级药检部门已接种好的菌种斜面(3代)。黑曲霉的0代菌种为保存于含15%甘油的0.9%无菌氯化钠溶液中的孢子悬液冷存管。中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏治理中心供给的冷冻枯燥菌种的标签

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CMCC(B)代表细菌(bacteria),CMCC(F)代表真菌(fungi)每种菌具有固定的代号。

标准菌的验收

从菌种保藏中心购置的原始菌种管是玻璃安瓿装的冻干菌，接收同时应检查是否有随菌种附有的相关资料。接收菌种时应检查安瓿的数量和名称，和每一支安瓿的完整性。在相应的菌种接收记录上记上全部的关于菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。在菌种安瓿及菌种管上粘贴标签，内容包括:菌种名称、菌种代号、代次、接收日期、接收人、贮存条件、有效期至。购入的0代原始菌种储存

于,20?，有效期为三年。从上级药检部门购置的已接种好的菌种斜面(3代)应检查菌种管是否完好。储存于2,8?，有效期为3个月。

标准菌的复苏、复壮及标准贮存菌株的制备

物品及试剂:接种针、酒精灯、移液管、75%酒精及75%酒精棉球

培育基2

改进马丁琼脂培育基:用于黑曲霉复苏、复壮.

液体硫乙醇酸盐培育基:用于生孢梭菌复苏、复壮.

养分肉汤培育基:用于金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、乙型副伤寒沙门菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单胞菌复苏、复壮。

改进马丁培育基:用于白色念珠菌复苏、复壮.

操作步骤:

翻开干净工作台。

在安瓿的外外表用75%的酒精擦拭并让其自然风干。

用一小砂轮在安瓿的上部划一条线，用手轻轻将安瓿掰开(开启安瓿时必需留神，由于安瓿遇热时可能会裂开)。

以无菌方法用一无菌吸管从已预备好的上述液体培育基中移取0.5,0.8ml到安瓿中。e.轻轻地旋转安瓿以使冻干菌

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种和液体培育基充分混合并完全溶解。

用无菌吸管将安瓿内菌液全部转接到相应的液体培育基。

依据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培育于相应的温度(细菌培育温度30,35?，培育18,24小时;真菌培育温度23,28?，培育3,5天。观看是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长;假设不浑浊，细菌应延长培育时间至7天，真菌应延长培育时间至14天，假设仍未浑浊，灭菌处理。

黑曲霉的菌悬液先室温待菌悬液溶化后用无菌吸管吸取管内液体1,2滴滴在改进马丁琼

脂斜面上，用吸管涂布均匀，置23,28?培育5,7天，斜面正面为黑褐色厚绒状，色泽均一，不应有杂色，斜面侧面无色，接近菌层培育基略带黄色。确认后用含有0.05%(ml/ml)的吐温-80的0.9%无菌氯化钠溶液洗脱到无菌试管中。

取经复苏后的上述细菌菌液8-10ml至液体培育基中按g项操作对菌种进展复壮。以无菌技术向复壮后的菌种中参与100ml20%的无菌甘油混匀，1-2ml/管分装于冻存管。每个菌

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种制备10支，按挨次进展编号，最终一支做为质控管进展质量把握，即进展相应确实认。其余作为贮存管。黑曲霉的h项下洗脱液按h项下方法进展复壮，制成复壮后的孢子悬液20ml。以无菌技术向复壮后的菌种中参与20ml、30%的无菌甘油混匀，1-2ml/管封存于冻存管。制备10支，按挨次进展编号，最终一支做为质控管进展质量把握，即进展相应确实认。其余作为贮存管。将上述制备好的冻存管逐支粘贴标签。内容包括:菌种名称、菌种代号、编号、代次、制备日期、制备人、贮存条件、有效期至等。

j(贮存菌种管制备成功，储存于,20?，有效期为三年。

菌种确认

用无菌接种环从质控管中取细菌培育物接种到养分琼脂培育基平板上，或相应的宜于该细菌生长的鉴别平板上，划线分别出单个菌落。然后在30,35?下培育2,3天;同样的方法取真菌到玫瑰红钠琼脂培育基平板，并在23,28?下培育7天;培育后，观看其菌落形态，应符合该菌种形态特征。

污染处理5

假设在该平板上觉察有其他菌落生长，则说明或操作有污染或菌种不纯。将此被污染了的培育物灭菌处理。可查找缘由重分别选择纯菌落转接斜面菌种作为第四代。并重制备贮存菌种管

菌种的传代与保藏

将菌种接种至一颖培育基上，每萌发一次即称为一代，因此，当原始菌种复溶并转至培育基内生长，即认为已传代一次，从菌种保藏中心获得的冷冻